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标题: [求助]SH-SY5Y细胞培养问题 [打印本页]

作者: moonlight45 时间: 2012-2-11 10:39 标题: [求助]SH-SY5Y细胞培养问题

最近实验室要用一株神经细胞做实验，原代培养太麻烦，所以选择了SH-SY5Y这株细胞，从上海细胞所购买回来了，培养状态一直很差，用DMEM/F12培养基，没添加额外的L-Gln和双抗，仅添加了10%的FBS，细胞长得很慢，而且漂浮的很多，第一天换了液体，第2天看，又有很多细胞漂浮。园子里有哪位养这细胞的大侠传传经验啊！
或者，是上海附近有人养这株细胞的，我们可以换或购买这株细胞。目前我们实验室仅有KB，A549，HEK293，HEK593T，HeLa细胞。

作者: ladyhuahua 时间: 2012-2-11 10:39

这个细胞是比较难养，长的慢，一般一星期才可以传一代，而且密度也不大，标准的应该是圆型，无棱角的，出现棱角的细胞说明已经开始分化。加双抗不影响，抗生素毕竟是为了避免细菌污染对真核细胞损害基本无，不然人怎么可以用抗生素治疗。此外，该细胞贴壁不牢，可以说是半贴壁细胞。所以看到许多人对采用直接吹打不消化，我个人认为还是会造成一定机械损伤。所以我是采用0。25%胰酶+0。02%EDTA消化30s，倒去消化液，加新培养基轻轻吹打开。消化时间不长但可以分离细胞，便于更好生长。
没有图不好判断你细胞的状况，所以上图更好说明问题。

作者: 盼盼 时间: 2012-2-11 10:40

我也是刚从上海细胞所买回来的SH-SY5Y，状态奇差，而且不是圆的，有棱角是吧，难友啊

作者: qumm1985 时间: 2012-2-11 10:40

神奇！我们买回来很久了，就是一直养不好，而且发现有不少的细胞都分化了。

求教！

作者: jujuba 时间: 2012-2-11 10:41

这种细胞我也刚刚养，目前看起来长的还可以，明天打算传代

作者: jujuba 时间: 2012-2-11 10:41

解冻后加的15%的FBS,也加了双抗和谷氨酰胺。

作者: 3648755 时间: 2012-2-11 10:42

我也刚刚在养这个细胞，感觉这个细胞很好养，传代很快，一般在2天左右，细胞不是圆形，而是有棱角，上传两张请战友们鉴别鉴别，提提意见

图片附件: 80785887.snap.jpg (2012-2-11 10:42, 32.58 KB) / 该附件被下载次数 37
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10636

作者: 3648755 时间: 2012-2-11 10:42

再发一张

图片附件: 52732579.snap.jpg (2012-2-11 10:42, 29.5 KB) / 该附件被下载次数 33
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10637

作者: 3648755 时间: 2012-2-11 10:43

再补充一下从ATCC细胞库里查到得SH-SY5Y的照片，不是圆形的，而是长梭型和棱形

图片附件: 61963940.snap.jpg (2012-2-11 10:43, 29.19 KB) / 该附件被下载次数 43
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=10638

作者: 101010 时间: 2012-2-11 10:43

我现在也在养该细胞，细胞形状和caga发的图片差不多，但是我这里细胞长的也是很慢，传代后大概也是一周才能长满，不知caga同仁是怎么养的，使细胞长的那么快？希望大家交流下，谢谢！

作者: bananapeople 时间: 2012-2-11 10:44

一、人神经母细胞瘤细胞系SH-SY-5Y细胞常规培养与含有 100IU/ml青霉素及100μg/ml链霉素的高糖DMEM培养液中，如果长得不好可以增加胎牛血清浓度如15-20%
二、用0.125%的胰蛋白酶消化后，吸弃一部分培养液后，直接传代，不要加edta，不要离心，这个细胞贴壁不好，所以很好消化，而且低浓度胰酶也不影响传代。
三、这还是3年前做的，已经记不清了，但是我感觉当时养的还是很顺利。主要是血清浓度，和消化传代都是自己摸索的。
遵照上述方法，如果养的不好，本人不负有任何责任。

作者: 3648755 时间: 2012-2-11 10:44

谢谢楼上，我们的条件基本一样，只是FBS浓度稍低，我们会试下您介绍的方法，谢谢！

作者: baidukk 时间: 2012-2-11 10:44

这个细胞贴壁性是不好，塑料瓶能好点，最好用进口的胎牛血清，应该能好很多

作者: summerxx 时间: 2012-2-11 10:45

感觉SH-SY的5Y挺好样的，我的细胞长的很好，大约隔天就要传代

作者: 吴才子 时间: 2012-2-11 10:48

一、人神经母细胞瘤细胞系SH-SY-5Y细胞常规培养与含有 100IU/ml青霉素及100μg/ml链霉素的高糖DMEM培养液中，如果长得不好可以增加胎牛血清浓度如15-20%
二、用0.125%的胰蛋白酶消化后，吸弃一部分培养液后，直接传代，不要加edta，不要离心，这个细胞贴壁不好，所以很好消化，而且低浓度胰酶也不影响传代。
三、这还是3年前做的，已经记不清了，但是我感觉当时养的还是很顺利。主要是血清浓度，和消化传代都是自己摸索的。
遵照上述方法，如果养的不好，本人不负有任何责任。

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我现在养的SY5Y细胞，大概4天传一次代，遇到了很麻烦的问题，做MTT时，4小时后，吸掉MTT加DMSO时，总是会把细胞吸掉，离心后也不太好，大家遇到过类似的问题吗，有什么解决的方法啊，谢谢。。

作者: 831226 时间: 2012-2-11 11:00

大家做过这个细胞的分化吗？有经验的交流下，我前几天做了分化，3 4天左右就死掉了，原因可能是接种密度太小，然后又提高密度，已经诱导3、 4天了，还是增殖明显，没有见很长的树突。该怎么诱导呢？

作者: dragonkilly 时间: 2012-2-11 11:00

5y是神经细胞怎么可能是圆的？

作者: 大尾巴 时间: 2012-2-11 11:01

我也正在培养SH-SY5Y细胞，而且已经养了有大半年了，不过细胞生长一直很缓慢，即使以1：2的比例传代后也要大概一周时间才能长好，很是着急。我一直是用1640培养基+15%FBS，加双抗和谷氨酰胺培养的，想求助楼上是如何培养的，使细胞长的那么快？恳请赐教~~~

作者: pengke1983 时间: 2012-2-11 11:01

我的SH-SY5Y每次复苏都大量死亡，不能贴壁，求各位高手赐教怎么培养？

作者: pengke1983 时间: 2012-2-11 11:01

感觉SH-SY的5Y挺好养的，我的细胞长的很好，大约隔天就要传代

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细胞是哪里买的哈

作者: DDD 时间: 2012-2-11 11:02

感觉SH-SY的5Y挺好样的，我的细胞长的很好，大约隔天就要传代
请问用的什么培养条件？培基？血清？哪买的细胞？谢谢

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