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标题: [求助]单核细胞相关知识 [打印本页]

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:05 标题: [求助]单核细胞相关知识

请问一下各位前辈，不知道单核细胞被磁珠吸附后还能不能进行迁移试验，或者单核细胞迁移后或贴壁后再能不能被磁珠吸附，谢谢！

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:06

请问一下前辈，我的实验中如果转的膜的孔径是8um，磁珠是4.5um，我在书上看的是单核细胞大小为直径12-20um，那么结合磁珠的单核细胞还能否穿过这个滤膜的孔呢，还有在丁香园上，有战友说提的单核细胞可以培养7天左右，但我在书上却看到说单核细胞只能在体外培养1-2天，我自已养的感觉单核细胞的状态不是很好，还有如果细胞已经贴壁后（六孔板），我再加磁珠（2ul），然后轻摇后放在4度一个小时，感觉细胞和磁珠结合的不是很多，别人是先用磁珠结合经淋巴细胞分离液提取的单个核细胞，我只看到一堆堆的磁珠，并没有看到明确的单核细胞，为什么，在六孔板中的玻片的培养的细胞使用什么染色会好观察一些呢？下面这些图中深染的细胞是否就是单核细胞细胞呢？谢谢，急盼前辈指导。

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作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:07

第一张图为苏木素染色，第二张为瑞氏染色，第三张为苏木素加依红染色，请高手指导一下染色，应该选什么染色最合适呢？谢谢

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:31 标题: 回复 #5 kent 的帖子

我主要是想区分一下单核细胞和其他细胞（比如淋巴细胞）

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:31 标题: 回复 #7 kent 的帖子

我是做迁移，细胞在膜上，没办法做流式，只能做免疫组化

作者: 131415 时间: 2012-2-12 11:35

免疫组化不是也是用抗体的吗？免疫组化还需要用磁珠？

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我想他是用磁珠分选单核细胞，然后做迁移实验。

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:35

请高手看一下，这些图片中是否是单核细胞，第一张是单核细胞直接贴壁后用苏木素-依红染色，后二张是用单核细胞迁移后苏木素-依红染的色，谢谢了。

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作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:39 标题: 回复 #12 kent 的帖子

谢谢，但问一下一般单核细胞使用什么染色比较好呢？

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:40

向各位战友和前辈请教一个问题，我在提取人血的单核细胞后，培养三天后，感觉细胞的状态不太好，我提取的方法是：先用PBS稀释加抗凝剂的血（EDTA）,然后使用1077（淋巴细胞提取液）400g的离心力30分钟，然后吸取紧贴1077上的白絮样层，然后用PBS清洗，1500转/分离心5分钟，弃上清，再用PBS混匀，加入比重为1.064的percoll上，2000转/分，1小时，取紧贴Percoll层下部的白絮样层，最后再用PBS清洗离心，（1077为我们实验常用的淋巴细胞提取液，Percoll按（组织和细胞培养技术）中方法），请问一下，我这样操作对细胞的损伤大不大，方法可行吗？

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:42

Percoll我是按照我们的教材（组织和细胞培养技术章静波主编P92）的方法配的，先用Percoll原液和1.5mol NaCL(9:1,V/V)配成A液，比重为1.124，再用A液和和0.9%NaCL(1:1,V/V)配成C液，比重1.064，
我觉得方法应该可以，用1077，细胞层在1077的上样，说明细胞层比1.077轻，再用Percoll 1.064 ，细胞层在percoll的下面，说明细胞层比1.064重
有好多战友说他们提的单核细胞纯度可达95%以上，我打算明天去学校用流式测一下。
还有，人的单核是不能传代，有战友说他们的可以养很多天，我养的刚开始还可以，但几天后感觉细胞内有什么东西似的，是不是有可以污染了

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:43

没有，单个核细胞主要包括单核细胞和淋巴细胞，最主要的鉴别方法是CD14标记染色，镜下淋巴细胞要比单核细胞小，单核细胞是透明的，淋巴细胞相对透明度要差一下

作者: 羊咩咩 时间: 2012-2-12 11:47

你有没有将单个核细胞和单核细胞搞混？

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她没有弄混，是先用ficoll法分出PBMC，再用percoll法将PBMC中的单核细胞分出。

作者: 羊咩咩 时间: 2012-2-12 11:47

Percoll我是按照我们的教材（组织和细胞培养技术章静波主编P92）的方法配的，先用Percoll原液和1.5mol NaCL(9:1,V/V)配成A液，比重为1.124，再用A液和和0.9%NaCL(1:1,V/V)配成C液，比重1.064，
我觉得方法应该可以，用1077，细胞层在1077的上样，说明细胞层比1.077轻，再用Percoll 1.064 ，细胞层在percoll的下面，说明细胞层比1.064重
有好多战友说他们提的单核细胞纯度可达95%以上，我打算明天去学校用流式测一下。
还有，人的单核是不能传代，有战友说他们的可以养很多天，我养的刚开始还可以，但几天后感觉细胞内有什么东西似的，是不是有可以污染了

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请问您用这种方法分的单核细胞流式检测的纯度怎么样？？

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-12 11:47

QUOTE:

原帖由 羊咩咩 于 2012-2-12 11:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
Percoll我是按照我们的教材（组织和细胞培养技术章静波主编P92）的方法配的，先用Percoll原液和1.5mol NaCL(9:1,V/V)配成A液，比重为1.124，再用A液和和0.9%NaCL(1:1,V/V)配成C液，比重1.064，
我觉得方法应该可以，用1077，细胞层在1 ...

可以达到80%左右

作者: 羊咩咩 时间: 2012-2-12 11:48

您好，我现在也在准备用percoll分离液从PBMC中分出单核细胞，能和您具体交流一下吗？

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