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标题: [讨论帖]我的实验成长日记 [打印本页]

作者: DNA 时间: 2012-2-15 14:08 标题: [讨论帖]我的实验成长日记

我现在开始做实验，感觉真是很多学问。以前看到别人摆弄一些瓶瓶罐罐，以为就是很简单的事情，到现在才明白原来经过了一番辛苦的设计之后，下来的等待实验结果的心情是很难耐得，能够在实验室里默默操作等待着一个实验结果，需要一定的悟性和定性。
这两天我就在重复着一些技术员的活。我们的研究所条件算是中等的，不算是高级。细胞培养的设备也是很齐全，但是细胞培养室、准备室等等不是分隔得很严格，进入培养室不用穿隔离衣。在超净台上操作也不用带口罩和帽子，只要用75%的酒精擦洗一下双手就行了。有大约4个超净台，但是在操作的间隙时不会开紫外灯消毒的，因为多人在培养室里。只有在每天的实验结束后，将紫外灯打开消毒。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:06

我知道在这个论坛里的很多人都和我一样才开始进入实验室，大家可以来共同交流一下自己的实验和实验中的一些难忘的片段。我只是觉得一天的实验下来，虽然好像没有干什么事情，却特别的疲惫。希望和大家交流一下体会和感悟，也算是对自己的实验经历的一些总结。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:07

我的导师对我说万事开头难，熟悉了实验的规程也就不再有什么害怕的了。花一个下午知道怎么配试剂也是一件有收获的事，我到现在还没有着手配试剂呢，有很多细节需要注意，到我亲手配完了，我也要总结一下试剂的配置方面的tips。希望我们共同进步，顺利完成实验！

作者: october7 时间: 2012-2-15 15:08

我看了rubyberry写的成长日记，我竟有同病相怜感，实验室的规范化我觉得实有必要，如查每个来实验室的人都从泡酸洗管子开始学起，那我们都不用做实验来完成课题了，而且我觉得初学者刚开始都做不好，花费了大量的人力，何不将实验室统一管理，专人负责实验器械的准备？我们实验室甚至连tip头和盒都要自己买，所有的所有都是自己准备。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:10

呵呵
最近在等待我的细胞株的到来，并且配置一些基本的试剂，培养基和胰酶什么的，我希望能够准备的全面好一点，这样遇到什么不如意和困难也不至于慌了阵脚。有人对我说在科研中最重要的是解决问题和最终的论文发表，我觉得很对，最终就是为了一篇成功的论文。
今天我听了一些博士的开题报告，认真分析了一下应该具备的科研思路。概括起来，就是创新性、聚焦点、纵深拓展。有的博士在选题方面谈的是口水题，几乎是重复前人的东西，只是用更先进的方法检测之；有的是铺开层面，只是在某一层面上测试多种基因或分子，在某种程度上来说可能很有必要，但让人眼花缭乱，不知所云。而且，仅仅着重一个层面，却没有纵深方面的拓展，既浪费了精力，又使得自己的课题的创新性和力度不够。
现在我是以一个初接触科研的硕士的眼光来看待问题，可能还是有偏颇之处。看到别人的不足，可以提醒自己，并且避免犯这种错误。在这里记下以警自己。同时谢谢战友们的关心，这让我更有信心继续自己的实验，不断完善。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:11

今天偶然要去-20度冰箱里拿东西，却发现自己前几天配好的冻存的培养液由于冻时体积膨胀，已经把分装的试剂瓶给撑破了！一些冰冻成块的培养液就在冰箱的最底处。好心痛！在冻存时我预计可能会有体积膨胀些，预留了15ml的空间，却想不到还是不够的。我想大概250ml的培养液在冻存时应该预留50ml的体积才对。
没办法，只好把培养液先放到4度的冰箱中先冻融，明天再重过滤分装一次。以后再也不犯这种低级错误了！

作者: toy 时间: 2012-2-15 15:11

都一样，我洗瓶子，配东西，中间还有别的事一耽搁，整整准备了两个星期，前天终于把细胞养上了，总算长得还行
前段时间准备东西，配东西，都有点走火入魔了，整天想这怎么配，那怎么配，灭菌灭好了没，可别污染了，Ph值到底调多少，唉，现在总算清楚了。。。。。。。。。
整天特别累，但一想还是在准备阶段，细胞都不知何时养上，就很郁闷。
都是新人，大家一起努力吧，加油：）

作者: is2011 时间: 2012-2-15 15:12

我的实验条件也不怎么样,关键是没钱,不过也还要做呀,第一次复苏的细胞没养好,已经倒掉了;昨天又复苏了一管,今天换液-无菌操作很关键,希望大家互相鼓励,互相帮助,一直坚持下去.

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:13

呵呵，今天是一个喜出望外的日子，昨天收到我的细胞寄出的消息，本以为会明天到，想不到今天中午就已经收到了，真是开心。
细胞购自武汉中国典型培养物保藏中心，EMS的速度只需要一天半的时间到货。培养瓶充满了培养液，瓶口用封口胶密封了起来。
这些天一直看别人在做细胞培养，轮到自己的时候兴奋劲一过就开始有一点手足无措了起来。我按照无菌操作的规则，在超净台上将培养瓶中的培养液用吸管转移到离心管中。在倒置显微镜下观察，细胞的长势还是不错的，大约有50%confluence。估计放入CO2培养箱中，明天早上就可以传代了。
呵呵，大家一起加油啊

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:13

真是没有料到，细胞传代后状态就不怎么好了。
我用的0.25%的Tripsin/EDTA消化。
取长满细胞的培养瓶，吸去培养液，用消化液冲洗了一下，立即吸掉冲洗液，加入大约1ml消化液，在细胞表面滚动了4-5圈后立即将消化液吸去。再加入大约1ml消化液，滚动4-5圈后吸掉消化液，仅余细胞表面少量消化液。
放到显微镜下观察，细胞仍然是贴壁的。我将培养瓶放入培养箱中，拧松瓶盖。三分钟后，取出培养瓶，在镜下观察细胞胞质回缩，间隙变大，有部分已经脱落。
我立即又进入无菌操作台，于培养瓶中加入少量培养液，在细胞表面来回流动了3-4圈，算是终止了胰蛋白酶的作用。吸去冲洗液后，加入了大约5ml培养液，在培养瓶中用吸管反复冲洗细胞贴壁的那一面，大约冲洗了大概有100下，后拧紧瓶盖，在显微镜下观察见大量细胞都已脱落，而且大部分是单个的细胞，即单细胞悬液是制作成功的。
随后我用一滴滴入血细胞计数池。余下的细胞悬液平均分于3个细胞培养瓶（加上传代用的细胞培养瓶）。每个培养瓶加入培养液使培养瓶中培养液的体积达到大约5ml。
镜下观察，细胞的接种密度应该是足够的。这里要说明的一下，我用的是原来寄送细胞过来时，细胞培养瓶中充满的培养液。因为我怕细胞不适应这里的培养环境，所以用了它原来的培养基。
像我培养的RL95-2细胞，是一种肿瘤细胞，因该在2-3小时内贴壁，第二天换液时应该全部贴壁才对。可是第二天去看时，细胞几乎仍然处于悬浮状态！这是怎么一回事呢？
我仔细考虑了我的操作，又向其他的师姐们询问。操作几乎没有什么明显的错误，细胞消化是也没有过渡。可是为什么细胞不贴壁呢？难道是不适应这里的培养条件？可是我用的是它原来的培养基阿！
师姐们的意见是：培养基的问题。在细胞寄送过来的时候，虽然培养液时充满培养瓶的，可是毕竟含了许多细胞代谢物，对于传代细胞有害。
也有师姐认为：在细胞传代过程中应该在制成细胞悬液后离心后去掉上清液，然后再加入新鲜的培养基制成细胞悬液，这样才能够彻底终止胰蛋白酶的作用。
现在的我也是六神无主。寄送来的细胞是多么珍贵，可是才传代一次就已经不景气了，我还没有冻存保种。想想真是很伤心，对于我的实验积极性是一个严重的打击。
同志们，给点参考意见？我怎么也想不通，怎么就这么不景气呢！都说肿瘤细胞株怎么养都不会死的。看来我是不太能够养这些小东西的。
今天看到一瓶又零星的贴壁，换了自己的培养基了，然后又加了一些血清。希望明天再去看的时候能够景气一点。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:14

后来做了一下细胞计数，细胞大约为5*10^5/ml，应该说细胞接种的密度绝对是够的。
有一点无可奈何。

作者: gemei0115 时间: 2012-2-15 15:14

原因可能有：
1 细胞消化过之后，吹打用力过渡，可能已经将部分细胞吹打死了。因为你说吹打了100次左右了。刚开始作细胞的时候总是害怕细胞被消化过渡，所以有很多新手都是刚看到细胞收缩就终止消化，这样往往容易造成用很大的力量吹打才能将细胞吹下来，用的力量过大就会容易造成细胞的死亡。
2 不要全部用他的培养液，半量添加他的培养液。细胞在新的环境中有个适应的过程，在你的培养环境中，逐渐换成你的培养液，也不要全部用他的，毕竟细胞要进行代谢，代谢中存在一些有益的，但也有害的物质。
祝实验顺利

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:14

现在我是一心一意的等待着细胞状态转好了，希望可以平安度过这一段时期。我以为养细胞，换液体，传代还是很简单的事情，却想不到自己只是形似而达不到神似。还是需要在实践中不断的积累经验。别人的经验告诉你了，知道了，可是还是会犯错。只能不断的提醒自己，犯错了能够弥补并且积极改正才好。
谢谢nobelli的分析，对我很有帮助。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:15

昨日我仔细研究了一下细胞传代的方法，我发现胰蛋白酶消化后，细胞轻轻拍打下来然后吹打成单细胞溶液就可以了，现在看到细胞没有消化下来就放到培养箱中，稍稍拧松瓶盖，过2-3分钟再拍打一下，细胞成片掉下来再加入培养液终止消化，吹打成单个细胞悬液即可。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-2-15 15:16

我也是刚进实验室的新手，花了两个星期洗瓶子，配液，现在前期工作已经准备的差不多了，就等着养细胞了，可偏偏碰上十一（我养原代），病房手术量骤减，早知道就事先取点标本了，那现在就差不多可以养上了。现在在等待中，心情很激动，但自己没有经验，以后还要多上来跟前辈们学习，多多交流，共同进步，希望大家的细胞都能长的棒棒的

作者: dongdongqiang 时间: 2012-2-15 15:16

我觉得你那位师姐说得对:在细胞传代过程中应该在制成细胞悬液后离心后去掉上清液，然后再加入新鲜的培养基制成细胞悬液，这样才能够彻底终止胰蛋白酶的作用。

作者: fei1226com 时间: 2012-2-15 15:17

楼上的，一般没有必要那么繁琐的。一般加入培养基之后，血清中所含有的物质足够终止消化的了。
慢慢来，不要着急。第一次做嘛，难免的

作者: 911 时间: 2012-2-15 15:18

我的细胞养了3个月了，但一直没有养好，经过数十次的失败，总结出一点自己的体会，与大家分享。
1、做细胞培养，任何事情都要身体力行，绝不能让别人代劳，因为细胞培养受太多的不确定因素的影响。
2、规范操作，这是做细胞培养的基本功，没有规范的实验操作，很难养好细胞。
3、以上两点，我想大多数同道都能做到，但有一点是我们常常忽略的，那就是对一切都要持怀疑的态度。当细胞培养失败时，任何因素都值得怀疑，尤其看似正常的东西，只有如此，才可能尽快找出失败的原因。
以下是我在养细胞时的两次失败总结：
1、刚开始养细胞时，培养液的PH值总是通过酚红指示剂的颜色和PH试纸来粗略判断，但细胞总养不好，后来我用PH计测正红色的培养液，发现PH值高达8.4，此事告诉我，培养液的酸碱度绝不能仅仅通过颜色或PH试纸来简单判断，最好用标准PH计测，配好的培养液，一周后若颜色无明显变化，可用试纸简单测一下，若有较明显变化，最好再次用PH计测，以免影响细胞生长。
2、最近，我养的细胞总是碎片很多，并且不出一周，细胞就大都死亡了，经多次调整，但始终未找出原因，肉眼观察已培养3天的细胞培养液，仍透亮清澈，但今天我用高倍视镜观察，发现细胞是被污染致死。此事再次告诉我，做细胞培养，当失败时，你可以怀疑任何因素，除你想到的可能失误外，尤其还要考虑那些看似正常的因素，往往原因就在其中。
以上两点是我的一点体会，写出来供同行交流学习，谢谢！！

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:18

怎么用高倍镜看出来细胞被污染？
最近养细胞浮起来的很多，也不知道是什么原因，现在血清加至20%，又用了一些胰岛素，不知道状态能不能转好。
不知道有同仁买过来的细胞就状态很差的时候怎么处理的？有抢救过来的细胞吗？

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:19

今天看到同一个实验室的细胞污染了，镜下很多活动的杆状细菌，真的很可怕呢。原因是使用超净台的时候忘了打开层流。暗中庆幸我的细胞没有被污染过

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:20

经历了一个多月的养细胞的过程，我的细胞生长进入比较稳定的状态了，前一段时间无论怎么努力，细胞总是会漂起来，而且形态上不是太好看，一摊一摊的铺着，看上去有空泡状，很脏的样子。后来我用试纸测试了一下PH值，发现完全按照说明书上配置出来的培养基竟然是7.0左右，也就是说细胞一直以来都是被我泡在醋缸里，这样怎么可能长好呢，而且由于溶液偏酸，溶液的渗透压也不稳定，所以对细胞的形态影响较大。
后来我按照师姐们的经验，再次配置培养基的时候多加了一些NaHCO3，结果溶液由原来的桔黄色变为比较喜庆的大红色透亮的溶液。测试后PH值为7.2左右。
我将原来配置的培养液用灭菌的5.6%的NaHCO3溶液调整了PH值，使溶液的颜色都变为大红色。后来培养的细胞就很少漂起来了。而且细胞的形态也转好了，但是生长的比较慢。可能是才从酸性环境中恢复过来。
本来我的细胞已经所剩无几了，后来我发现被我放在培养箱一角的三个星期没有管理的细胞竟然奇迹般的成片生长了。真是让我喜出望外。换过了调了PH值得培养基以后，细胞生长的也挺好的。
总结一下：养细胞最重要的还是PH值得问题。就像人体内偏酸偏碱了都不行。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:21

上个星期培养箱坏了，细胞在恶劣的生长环境下坚持了5天，镜下看全都萎掉了，皱巴巴的贴在培养瓶上。我以为它要活不成了，想不到生命力旺盛的细胞在培养箱修好之后又奇迹般的恢复了。
养细胞在进入角色之后，变得很是简单了。我现在最关心的是培养液的pH值得问题，一旦pH值调好了，细胞就生长的很好。而且我发现细胞生长环境的pH值得范围还是很宽泛的，培养基里面加了Hepes缓冲，即使培养基略偏碱，放入5%CO2的培养箱中，也可以缓冲的很好，细胞很适应。一旦培养基pH值有问题，单看细胞的形态就可以看出来，就像是充水似的状态。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:21

前一段时间看到网上有人留言说在消化过后离心彻底终止胰酶的作用，我翻了一些资料，说是加了EDTA的消化液要加入Hanks液才能彻底终止EDTA对细胞的影响，同时也能够终止胰酶的消化。我如书所说做了一下，也没有发现有任何的太大的不同。
所以我觉得如果不是要求很严格的话，就用培养基终止消化的作用应该是没有什么问题的。

作者: 8s5g 时间: 2012-2-15 15:22

我现在对实验真是又爱有恨！我的实验进行了近7个月，中间养了3种细胞，老鼠摸了上百只，直到一个月前还没有一个满意的结果，真是上天对我的考验阿！这期间可想而知，我洗了多少瓶子阿！！手都掉了几层皮，不过还好的是最近终于有一些结果出来了，可喜可贺阿！！

作者: plaa 时间: 2012-2-15 15:23

各位比我都好，我到现在还没想好要养什么细胞。以前从来没接触过细胞培养方面的东西，现在老板突然让我换个题，可能要养细胞了。不知在那能找到关于细胞培养的详细的资料，比如要什么瓶子之类的．让各位笑话了，我这连条件都没，还不知道要上那做．

作者: join 时间: 2012-2-15 15:24

我也在养细胞，本来是师姐带我的，我自己也做了两次，没有出现过污染，现在细胞突然出现污染，很是奇怪，因为我每次看细胞时，我都是用新洁尔灭擦过双手才打开孵箱的，真是郁闷！

作者: 8princess8 时间: 2012-2-15 15:24

我还没开始进实验室，不过有一点期待。看师姐做得好辛苦，又觉得好郁闷。我们老板也不管我们，师姐又只有一个，以后有不懂的都要自学，或是偷师学艺，想起来还是挺怕啊。不过我希望所有的人都可以有一个好的结果。

作者: bananapeople 时间: 2012-2-15 15:25

我才从学医的转行入学生物的，简直是一团乱麻，什么都不知道，每天糊里糊涂地看人家传细胞，自己也学着传细胞，但是更深入的如许多检验仪器的了解及使用方法的学习，手头上缺乏这方面的资料，也不知哪去查，心悸啊

作者: duoduo 时间: 2012-2-15 15:25

1、我用的0.25%的Tripsin/EDTA消化。
答：用EDTA消化后，必须离心，否则不贴壁；
2.不明白为什么加那么多变消化液？而且吹打那么多遍，早吹死了，能贴壁才怪；
3、也有师姐认为：在细胞传代过程中应该在制成细胞悬液后离心后去掉上清液，然后再加入新鲜的培养基制成细胞悬液，这样才能够彻底终止胰蛋白酶的作用。
你师姐的认为非常错误，概念性的，胰酶的终止考的是含血清的培养液，而离心去处的是EDTA。

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:26

楼上的那位十分感谢你的建议，我现在用的0.25%的Tripsin/EDTA消化过后用Hank's液冲洗过后终止消化，吹打几次后将细胞分瓶就可，如果是精细试验则进行细胞计数。
细胞经过离心后必定会有损伤，所以我觉得如果细胞比较珍贵的话不离心操作比较好。Hank's液含有钙镁离子，可以终止EDTA的作用，也可部分去除胰酶作用，不必一定离心。我已经这样操作了三个月，细胞状态很好。

作者: fqswdzd 时间: 2012-2-15 15:26

我也是样细胞的新手，看到大家的成长历程，我感到了一丝安慰；我这几天很郁闷，买来的细胞养的不是很好，大干一场的劲头使不上。面对病人，很坦然；面对细胞，很无奈。
自己勉励自己，郁闷之后，会好些吧？

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:26

呵呵，细胞最怕的是环境的变化太大，换液不要太勤，每隔两天换一下就行，血清的浓度10%即可，太高了会抑制细胞的生长。要是每天不定时地去培养室看细胞，再好养的细胞都会被宠坏的。最好今天给它换了液，明后两天就去忙你的事，千万别去管。
我以前就犯过这毛病，太在乎细胞了，反而不断的改变了细胞的生长环境。结果，因为PH值的不稳定，血清浓度的不稳定，细胞的生长都被抑制了。
祝实验顺利！

作者: ALALA 时间: 2012-2-15 15:27

看到楼上的留言，颇有同感。
我是从五月份开始养细胞的，不过养的是昆虫细胞，没有哺乳动物细胞那么难，毕竟不用胰酶消化，省去了不少的工作量。所幸一个多月的实验没有出现过污染的问题。后来暑假出差了两个月。
之后更换了实验室，也遇到了和楼上同样的问题，要筹建细胞室。以前都是别人做好的东西，血清，培养基，细胞传代，灭菌等等，现在都要自己来解决。真的是“事非经过不是难”，每天我都要跑到楼下去向别人学习这些东西，订购器材，试剂，同生物公司的人讨价还价。
还好，我的细胞室在一个月建成了，现在的状况挺好的。下一步再做实验，因为细胞只是一个使用的平台，主要还是实验的结果。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-2-15 15:28

原来有这么多的同盟,我以前一直一个人做事,觉得很苦恼.今天看到你们的帖子,心里说不出的滋味.九月份我刚来的时候一直在洗瓶子,可能洗了一个多月了吧,接下来就是帮助师姐做实验,配一些简单的试剂.上个星期才开始养别人给我的细胞,这几天细胞状态越来越不好,通透性差,培养液有杂质,开始我以为细胞被污染了,心情很沮丧,后来发现细胞还在生长,只是状态不如以前,我想可能是我换液不勤快,导致细胞老化.具体的我还没有找专家鉴定一下.你们的帖子让我看了觉得很温馨,我感觉找到了家.
我对培养基的颜色变化还是不清楚,稍微发黄的颜色是不是细胞就不能生长了,我每次都是用时间来卡,大概两三天就传代,中间有时不换液,这样可以吗

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:29

我想以我的经验谈两点。
1、我现在很在意培养基的PH值问题，一般7.3左右的培养基颜色应该是深红色。如果偏黄，在我的经验看来溶液偏酸，而且酸的很厉害。在这个时候，细胞生长会呈现空泡状，细胞碎片很多，在镜下看细胞瓶中很脏。而且细胞的形状呈现摊开状，好像充水肿胀的样子。
2、细胞生长快的时候，培养液两天就会变得很黄，如果这个时候没有及时换液，细胞会因为营养不足而呈现空泡状，但是和偏酸时的形态有所不同，细胞还是好的。在镜下少量空泡时及时传代，细胞会生长的很好。如果出现大量空泡，即使传代细胞活力也不是很好，这时用来做实验更是事倍功半。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-2-15 15:30

谢谢楼上的建议,我刚刚问了师姐,她告诉我是细胞老化了,我很高兴,细胞没有被污染,这是养细胞以来最高兴的时候.我总结自己的失误在于换液不勤快,开始两天每天换,后来听别人说改为隔天.细胞状态就变差了,所以以后不能太硬搬,要自己感觉.每个人对旋瓶盖都有自己的尺度,我该旋开瓶盖1/4?还是按师姐的,大概1/8,还是其他?困惑.胰酶消化的程度还是掌握不准.唉,只有自己慢慢来了.
我快开始预实验,希望自己快些进入状态.

作者: hyuu 时间: 2012-2-15 15:31

试验真的是一种生活呀.
我是新手,马上开始准备做实验,
想从血块中提取mRNA.
不知道血块中细胞的破坏情况,还是不用知道.
是找不到这方面的佐证,很郁闷呀.
还请大虾们不吝赐教.
多谢了!

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:31

养细胞的三个月中，我从来没有碰到过细胞的污染问题，因为操作一直都很谨慎。前一阵子培养箱中的很多种类细胞都有细菌污染，而我的细胞却完好，心中很有一种得意，开始马虎起来。这是悲剧的开始。一个实验的成功与否，很大程度上不是因为实验的过程如何，而取决于一个实验者的态度问题。养细胞同样并不仅仅是一个技术性的活，更需要实验者的精神。在实验精神上，我就犯了一个错误。
就在元旦前夕，我的每一批细胞都开始污染，而这时其他人的细胞都好转。别人都开玩笑可能是先前的污染留下的后遗症。我也乐于接受这样的一个结论，因为这样是一种交待，但是心中十分的清楚，这是与自己的态度和操作有关系的。也许在某一天操作的时候不太重视，所以污染了。
我知道现在所有的存活细胞可能都是污染的。所以都丢弃了。幸亏从前冻存了一大批细胞，所以还是很幸运可以复苏一下。以后只要细胞状态好得时候就冻存起一批来，以备不时之需。
今

作者: DNA 时间: 2012-2-15 15:32

最近连绵阴雨，我所遭遇到的细胞污染简直可以用战斗来形容。一开始的时候因为培养液没有了，所以用了一瓶放了大概有两个月之久的一瓶，结果污染了霉菌。一查，原来培养瓶放久了容易产生霉菌。于是将此瓶扔了。
重新复苏了一瓶细胞，发展壮大到了5瓶的时候，有一天看到已经长得不错了，想在第二天进行消化接种，于是给每一瓶细胞都换了液，谁知道第二天一看也都遭遇污染，同时才知道当天在同一超净台操作的都有污染。自叹运气太差。
再次重来。这次严格灭菌的所有过程。细胞长了两瓶。昨天接种了一块六孔板，准备今天进行转染。在分装液体的时候，不小心蹭了一下瓶口。当时心想应该不会运气这么背吧。在火焰上过火后就继续使用了。但是今天一看，细胞仍然是污染了。看来实验是不能够存在任何一点侥幸心理的。
懊恼之余，仍要反省自己的麻痹大意和懒惰。

作者: redbutterfly 时间: 2012-2-15 15:32

有人养内皮细胞吗？细胞的鉴定步骤详细点的有没有？求解

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