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标题: [求助]关于神经细胞培养 [打印本页]

作者: yhz1973 时间: 2012-2-15 15:35 标题: [求助]关于神经细胞培养

本人最近在作神经元/胶质细胞共培养，养出的细胞无法认定是胶质细胞还是成纤维细胞，想请各位高手帮小弟辨认一下，感激不尽！！！
请问：
1、图中画圈的是星型胶质细胞吗？
2、该图是否能够算作是已经建立了神经元/胶质细胞共培养？

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作者: yhz1973 时间: 2012-2-15 15:35

图1中画圈的是否是胶质细胞？

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作者: yhz1973 时间: 2012-2-15 15:36

1、图2中画红圈的是否是胶质细胞？
2、图中黑圈的是否是成纤维细胞？

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作者: yhz1973 时间: 2012-2-15 15:38

另外，小弟还想请请教高手们：
1、如何辨认胶质细胞和成纤维细胞，能否发几张典型的图片让小弟学习；
2、若有做过共培养的高手，请发几张共培养的图片，供小弟学习，万分感谢！

作者: 969 时间: 2012-2-15 15:39

~~~~~~~~~~~~~~~~~

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作者: windy+++ 时间: 2012-2-15 15:40

QUOTE:

原帖由 969 于 2012-2-15 15:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
~~~~~~~~~~~~~~~~~

你的图片是什么地方的成纤维细胞啊？

作者: wmp1234 时间: 2012-2-15 15:41

根据形态来判断是一个方面，另可根据染色来鉴定啊！

作者: utt0989 时间: 2012-2-15 15:41

楼上的意思是做GFAP鉴定么？

作者: 131415 时间: 2012-2-15 15:44

在形态上分辨细胞很难的，尤其是贴壁以后的细胞，需要作鉴定才能最终分辨。

作者: utt0989 时间: 2012-2-15 15:46

只是通过形态判断的是不行的，必须拿出组画染色的结果才能算术的。

作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:46

我认为你分辨的基本正确。下面是我曾经染色的神经细胞，可参考。

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作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:47

上图为神经元。下面这张为神经胶质细胞。

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作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:47

下面这张为神经细胞和神经胶质细胞。

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作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:47

神经元细胞。

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作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:48

染色后的神经元感觉像未染色的神经胶质细胞。神经胶细胞染色后像棉花一样。

作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:49

下面为成纤维细胞。

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作者: wsll 时间: 2012-2-15 15:49

另外神经胶质细胞可分裂增殖，而神经元不会。养的时间越长，神经元越少，最后只有神经胶质细胞了。

作者: 831226 时间: 2012-2-15 15:50

这是典型的胶质细胞

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作者: 831226 时间: 2012-2-15 15:51

这是另一种形态的胶质细胞

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作者: 831226 时间: 2012-2-15 15:51

以上都是GFAP染色

作者: 831226 时间: 2012-2-15 15:53

这是神经元，tubulin3染色

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作者: milkdog 时间: 2012-2-15 15:54

本人最近在作神经元/胶质细胞共培养，养出的细胞无法认定是胶质细胞还是成纤维细胞，想请各位高手帮小弟辨认一下，感激不尽！！！
请问：
1、图中画圈的是星型胶质细胞吗？
2、该图是否能够算作是已经建立了神经元/胶质细胞共培养？

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这是神经元

作者: kswl870 时间: 2012-2-15 15:56

1、图2中画红圈的是否是胶质细胞？
2、图中黑圈的是否是成纤维细胞？

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右下角处画黑圈的是纤维细胞。
培养细胞是必须在倒置显微镜下观察的，但是如果鉴定细胞必须通过特异性染色才行。显微镜下判断不一定完全准确，但是熟悉了也可以的。

作者: 生物迷 时间: 2012-2-15 15:56

谢谢高指点！最近做了星形胶质细胞的荧光，请高手再帮忙看看。

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作者: 生物迷 时间: 2012-2-15 15:56

图片同上

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作者: 生物迷 时间: 2012-2-15 15:57

图片同上

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作者: yychen 时间: 2012-2-15 15:57

参考我在神经板块发的培养方法吧。那种方法培养的细胞几乎没胶质细胞。

如果你想共培养，就把神经细胞密度种的稍微小一些，胶质细胞就会长起来

血管膜剥的干净的话，是没有成纤维细胞的，如果你实在不能剥干净，那么参考我那帖子里的神经元悬液密度-梯度离心法，也可以去掉成纤维细胞。

作者: 101010 时间: 2012-2-15 15:58

这个是吗，怎么与上面的星形胶质细胞GFAP染色不同啊，AC的突起是细长的还是短粗的呢？

作者: skytree 时间: 2012-2-15 15:59

我发的图是400倍，现在发的是100倍

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作者: 49888 时间: 2012-2-15 16:00

荧光图片很好看啊
是用什么染色的?什么显微镜拍照的?放大倍数是多少?

作者: 987789 时间: 2012-2-15 16:01

GFAP染色，就是一般的荧光显微镜照的，有400的也有200的

作者: 987789 时间: 2012-2-15 16:01

有没有战友做过星胶的，能否发几张长得比较密的星胶图片比较一下？

作者: langlang 时间: 2012-2-15 16:02

请高手看一下，我培养的星形胶质细胞，是否存在问题，指点一下

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作者: 3648755 时间: 2012-2-15 16:04

图片很漂亮，请问荧光的具体步骤是怎么样的啊，我的老是做不好

作者: october7 时间: 2012-2-15 16:04

我也在养星形胶质细胞，感觉纯化比较困难，杂细胞很多。想请教各位高手下图（40倍倒置光镜）的一些问题：
A区域的细胞感觉纤维联系比较多，是星形胶质细胞么，还是成纤维细胞？
B区域的亮点状细胞好像是趴在其他细胞背上生长的，是不是小胶质细胞？
C区域的细胞感觉胞体比较大，胞核较模糊，排列密集，是成纤维细胞么？
D区域的细胞好像散在分布，是一种特定的细胞还是细胞中毒肿胀或凋亡坏死的形态呢？
小弟在此不胜感激！

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作者: pencil菲 时间: 2012-2-15 16:06

我只能谈谈自己的看法：
A区我还是认为是星胶，说实话，星胶长密了以后和成纤维真的很难区分；资料上都说星胶是呈铺路石样排列，但是我一直都没有搞懂所谓的铺路石是什么样的；
B区的亮点个人认为是细胞即将死亡或是已经死亡的表现，因为我养的星胶也出现过这样的情况，一般是在长期不换液或者生长过密而没有及时传代是出现这种亮点，所以我估计是细胞死亡的表现；
C区我还是认为是星胶细胞，因为成纤维细胞不会出现这种排列；
D区细胞确实有可能是细胞开始崩解的表现；
以上是我自己根据经验谈的看法，不足之处请各位战友批评指正；

作者: pencil菲 时间: 2012-2-15 16:06

这是我的星胶图片，很多人说是成纤维细胞，确实是呈束状，我自己也不敢肯定到底是星胶还是成纤维，但是我觉得在星胶长密以后就成了这种束状。没长密之前还是可以分辨的，只是一直没搞懂所谓的“铺路石”是怎么样的。

作者: pencil菲 时间: 2012-2-15 16:06

这是没长密的

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作者: pencil菲 时间: 2012-2-15 16:07

这也是没长密的

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作者: pencil菲 时间: 2012-2-15 16:08

这是长得比较密的

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作者: pencil菲 时间: 2012-2-15 16:08

这是长得很密的

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作者: dotaaa 时间: 2012-2-15 16:09

兄弟，太感谢你了，我也在发愁。
我发现你养的细胞和我的很像，都是很难和成纤维细胞分辨，我现在每次取材的时候都发现脑膜很难完全剥除，总是留有点脑内血管的星星点点，不知会不会导致成纤维细胞生长。
我每次取材和传代都用差速贴壁法一次，但是发现新瓶里面的细胞和差速贴壁瓶的细胞很相像，不知是不是***作的问题。我用的是0.25%的胰酶+EDTA消化15分钟，差速贴壁30分钟

作者: dotaaa 时间: 2012-2-15 16:09

为了确定星形胶质细胞和成纤维细胞的区别，我专门取了剥除的脑膜组织培养了一瓶，图片如下：
培养2天的

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作者: dotaaa 时间: 2012-2-15 16:10

培养5天的

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作者: dotaaa 时间: 2012-2-15 16:10

我怎么觉得和兄弟你的细胞很类似的，其实我有很多个瓶子都有这些漩涡状生长的细胞，甚至很多都占了主要地位，我都很怀疑是不是都是成纤维细胞了，不知有没什么好办法能去除成纤维细胞？
另外你说的“铺路石”样会不会就是我第一张图上C区域的细胞排列样子呢，还是像下图的细胞样子呢（也是我这普遍出现的细胞，胞体比较大，呈多边形，不能确定是否成纤维细胞还是AST）？

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作者: greenbee 时间: 2012-2-15 16:11

我做的是小鼠，每次做原代是都很小心，脑膜应该剥除得比较干净（除了将成片的脑膜剥下来，还专门用镊子将脑组织撕成细块，寻找并剥除残余的脑膜），同时还做了差速贴壁，所以这样的话，我觉得成纤维应该被大量去除。

作者: greenbee 时间: 2012-2-15 16:11

我怎么觉得和兄弟你的细胞很类似的，其实我有很多个瓶子都有这些漩涡状生长的细胞，甚至很多都占了主要地位，我都很怀疑是不是都是成纤维细胞了，不知有没什么好办法能去除成纤维细胞？
另外你说的“铺路石”样会不会就是我第一张图上C区域的细胞排列样子呢，还是像下图的细胞样子呢（也是我这普遍出现的细胞，胞体比较大，呈多边形，不能确定是否成纤维细胞还是AST）？

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“铺路石”我也不知道究竟是什么的，只是在很多培养星胶的资料上都这样描写培养状态下的星胶，所以一直都很困惑。

作者: one 时间: 2012-2-15 16:12

这是我做的AC 第二代（还未做鉴定）贴壁很牢用0.25胰酶-0.02EDTA很难消化下来最后用2型胶原酶消化下来传的各位都是怎么消化的呢？

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作者: 伊莎贝拉 时间: 2012-2-15 16:13

用BIOVISION的试剂盒，这个进口的，效果比较好~~我用的就是~

作者: 969 时间: 2012-2-15 16:13

我怎么觉得和兄弟你的细胞很类似的，其实我有很多个瓶子都有这些漩涡状生长的细胞，甚至很多都占了主要地位，我都很怀疑是不是都是成纤维细胞了，不知有没什么好办法能去除成纤维细胞？
另外你说的“铺路石”样会不会就是我第一张图上C区域的细胞排列样子呢，还是像下图的细胞样子呢（也是我这普遍出现的细胞，胞体比较大，呈多边形，不能确定是否成纤维细胞还是AST）？

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我觉得这个好像是星胶

作者: 生物迷 时间: 2012-2-15 16:15

求助：脂肪干细胞培养，需要加血清吗？请高手指点

作者: 131415 时间: 2012-2-15 16:16

不同的角质细胞形态差很多，有些和成纤维细胞很像，有些和上皮细胞很像。建议还是靠GFAP染色来判断。上面的3张如果是GFAP的话个人觉得染得有些淡，不是太典型，建议提高抗体浓度。

作者: okhaha 时间: 2012-2-15 16:18

这样的细胞，用GFAP鉴定过，电镜下也符合Astro的特征——染色浅、有突起、胶质丝。

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作者: okhaha 时间: 2012-2-15 16:20

GFAP鉴定

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作者: okhaha 时间: 2012-2-15 16:20

与上图对应的明场

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作者: greenbee 时间: 2012-2-15 16:21

与上图对应的明场

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个人感觉这张图片荧光太暗淡，不能很好说明问题，也不能排除非特异性染色。

作者: zzzz 时间: 2012-2-15 16:22

请教人的结膜杯状细胞所属的细胞系？急需中...

作者: lixi559 时间: 2012-2-15 16:23

请问大家都是用什么方法去除脑膜的？我们实验室是放在滤纸上用小刷刷掉的再用镊子夹取组织的，感觉去除的还比较干净 0票

作者: fsdd817 时间: 2012-2-15 16:24

你好，请问你培养的神经细成活多久？

作者: zsxan1990 时间: 2012-2-15 16:24

可以用免疫荧光，表达NSE阳性的细胞为神经元，而表达GFAP阳性的细胞应该为胶质细胞

作者: tangxin_80 时间: 2012-2-15 16:24

我最近也再养神经元细胞，可是养不好啊，想问问你，怎么消化的啊？我用胰酶消化完了，好多大鼻涕样黏黏的东西，离心根本离不下来细胞，不知道你事怎么处理的啊？先谢谢啦，指点一下吧

作者: 911 时间: 2012-2-15 16:25

QUOTE:

原帖由 tangxin_80 于 2012-2-15 16:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我最近也再养神经元细胞，可是养不好啊，想问问你，怎么消化的啊？我用胰酶消化完了，好多大鼻涕样黏黏的东西，离心根本离不下来细胞，不知道你事怎么处理的啊？先谢谢啦，指点一下吧 ...

用胰酶消化就会产生这个问题的，这是组织缠结在一起了，可以加一些DNA酶试试，估计会有改善。不过我没有加过DNA酶，可能加了DNA酶细胞产量会增高一些。

作者: guagua 时间: 2012-2-15 16:25

请问，你共培养是怎么做的？取的皮层还是海马？要加阿糖胞苷吗？培养几天开始用于实验啊？

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