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标题: [求助]裸鼠DC树突状细胞培养求鉴定 [打印本页]

作者: ritou1985 时间: 2012-2-27 13:30 标题: [求助]裸鼠DC树突状细胞培养求鉴定

从裸鼠股骨中分离的细胞
培养条件 rhGM-CSF 100ng/ml, RPMI1640 (预实验，没有鼠源GM-CSF的，也没有IL-4，先用这个顶着)
第5天，主要有两种细胞，一种圆的，一种张牙舞爪的，不知道成没成，张牙舞爪的那种有人说是巨噬细胞不是DC
求鉴定
因为这个实验是帮别人做的，我主要有一个疑问，裸鼠的BMC能不能诱导出来DC来的，因为没找到用裸鼠做这个的？
第一张 (100X 相差)

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作者: ritou1985 时间: 2012-2-27 13:30

第二张(100X 相差)

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作者: ritou1985 时间: 2012-2-27 13:31

第三张(100X 相差)

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作者: ritou1985 时间: 2012-2-27 13:31

第四张(400X 相差)

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作者: ritou1985 时间: 2012-2-27 13:31

第五张(400X 相差)

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作者: pencil菲 时间: 2012-2-27 13:32

连诱导的细胞因子都没有，你说会有DC会诱导出来吗？
圆的都是死细胞，张牙舞爪的是基质细胞。

作者: ritou1985 时间: 2012-2-27 13:32

连诱导的细胞因子都没有，你说会有DC会诱导出来吗？
圆的都是死细胞，张牙舞爪的是基质细胞。

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细胞因子是有的，只不过是人源的不是鼠源的，而且一般诱导的话IL-4不是必需的。
圆的不是死细胞，苔酚蓝检测过了，而且也不是完全圆的。

基质细胞是什么？

作者: pencil菲 时间: 2012-2-27 13:33

加人的等于没有加。
谁说IL-4不是必需的，诱导DC这两种细胞因子都是必须的。

作者: 49888 时间: 2012-2-27 13:33

加人的等于没有加。
谁说IL-4不是必需的，诱导DC这两种细胞因子都是必须的。

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好，谢谢指教。那我就跟那位老兄说说，还是去订两种细胞因子吧，因为手头上有人的所以就试试看。
至于IL-4，我是在一篇老方法上看到光用了GM-CSF。
别外请教一下，从裸鼠上能不能诱导出DC出来啊。因为找不到用裸鼠做的资料啊

作者: S6044 时间: 2012-2-27 13:34

你这个是贴壁的细胞形态，成熟的DC是漂浮的，IL-4可以抑制单个核细胞向巨噬细胞分化

作者: dog002 时间: 2012-2-27 13:34

裸鼠只是T细胞缺陷，不影响DC分化。

不过，为什么用裸鼠？没有任何意义呀！用裸鼠的与用正常的没有区别。

作者: yapuyapu 时间: 2012-2-27 13:35

裸鼠只是T细胞缺陷，不影响DC分化。

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不过，为什么用裸鼠？没有任何意义呀！用裸鼠的与用正常的没有区别。
原来的方案是想看荷瘤和没荷瘤的PBMC里的DC1和DC2的比例，因为是人源的肿瘤，所以只能用裸鼠。但后来觉得PBMC太少了点，就先用BMC来搞搞了。

作者: yapuyapu 时间: 2012-2-27 13:35

另外，再请教一下
细胞因子订哪个公司的比较好，R&D的怎么样？
工作浓度GM-CSF、IL-4 各50ng/ml够了吗？
我看见论坛上有的战友讨论到贴壁时间的问题，在这次预实验中，我发现如果仅仅放几个小时似乎根本不够，起码要要1天细胞才能粘在皿上面，几个小时轻轻吸出来的悬液除了淋巴细胞外也把我要的细胞都吸出来了，因为这些悬液再培养两三天也有很多细胞能贴壁。

作者: pencil菲 时间: 2012-2-27 13:36

骨髓诱导DC一般贴壁48小时再去除淋巴细胞。
如果你要研究荷瘤与不荷瘤的DC有什么不同，应该研究体内成熟的DC，而不应该再重新诱导，否则意义就不大。

作者: hold住 时间: 2012-2-27 13:36

想请教一下，做DC诱导分化这个实验订细胞因子的话，是订含BSA的那种还是不含BSA的那种。
BSA应该是对细胞因子有点保护作用吧，如果是订含BSA那种是不是溶解是也要用含BSA的PBS。
R&D的细胞因子是要求用Serological Proteins的馏分V BSA（目录#81-068）来重新配制蛋白溶液，有没有必要，还是随便找点BSA过滤一下就可以了?

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