标题:
[求助]HepG2细胞难以消化
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作者:
eric930
时间:
2012-3-12 13:13
标题:
[求助]HepG2细胞难以消化
各位大侠:
我养的HepG2细胞难以消化,用的0.25%胰酶(Gibco),放入培养箱温育近1小时,不知道是什么原因?
奇怪的是,我的一位师兄养的是同样的细胞,用同样的方法同样的胰酶,只需10分钟温育时间,不知道各位有何高见。
谢谢!
作者:
remenb
时间:
2012-3-12 13:14
0.25%+0.02%EDTA应该很快消化。
作者:
join
时间:
2012-3-12 13:15
我们以前消化HepG2细胞时在培养箱中放2min后有细胞间隙,3~4min后间隙变大细胞开始变圆。HepG2细胞是比其他细胞是稍微难消化一些,用玻璃培养瓶培养的话会比塑料培养瓶好消化一些,不过貌似生长状态要差些
作者:
ququer787
时间:
2012-3-12 13:24
我前几天养的胰腺癌细胞也不好消化,不知道是什么原因,别的细胞都比较好消化,就它不好消化.碰到的情况跟你差不多,你注意别让它长的太挤了,另外在胰酶中加点EDTA效果也会很不错
作者:
zhezhe
时间:
2012-3-12 13:24
消化前将细胞用PBS多洗几次,彻底去掉血清,消化会好很多。
————————————————————
同意......
其中一次的PBS在孵箱多放一会儿......
作者:
qhyu
时间:
2012-3-12 13:25
我最近也在养HepG2细胞,也是用的0.25%的胰酶,倒去旧的培养基以后用D-Hanks液洗3遍,然后加入1ml胰酶(50ml培养瓶),但是我不放在培养箱中,直接镜下观察,约2min后,可见细胞间隙增大,细胞稍微变圆。此时倒去胰酶,加含血清培养基,吹打即可。
作者:
ROSE李
时间:
2012-3-12 13:26
你的酶是不是配制了放很长时间啊?时间长了酶的效果会差一些!
作者:
ladyhuahua
时间:
2012-3-12 13:36
同意楼上的观点,如果胰酶存放时间很长的话最好冻起来,另外在配的时候加1,2滴1M NaOH。顺便说一句,如果酶没问题,一个小时还没消化下来,细胞也该扔了。
作者:
3648755
时间:
2012-3-12 13:38
胰酶调PH了吗
作者:
2541
时间:
2012-3-12 13:38
我也遇到同样的问题了,每次都是胰酶5分钟,消化两次才行。。
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