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标题: [讨论帖]如何杀灭所谓的”黑胶虫“ [打印本页]

作者: 缘yuan 时间: 2012-3-13 16:12 标题: [讨论帖]如何杀灭所谓的”黑胶虫“

(转载)

尊敬的版主，各位群友：
你们好。在我发这份帖子的时候我还在犹豫，是否应该将我的经验如实地告诉给大家，因为所谓的黑胶虫污染十分普遍，难以消除，很多人谈黑色变，我究竟有怎样的方法消灭黑胶虫，我的观点和方法是否能得到大家的认可，无论怎样，我相信我的经验绝对值得大家借鉴，会对那些困扰于所谓的黑胶虫污染的战友们有所帮助。
首先，世界上根本就没有什么黑胶虫，没有人知道黑胶虫的英文名字是什么，没有哪个权威地方能够查到它的来源，没人知道是谁给它命的名。在微生物学上也没听说过有这么一类微生物。那么是谁给它起了个这么一个恐怖的名字呢？答案是一个什么都不懂或者是一个别有用心的人起的名字。
其次，黑胶虫是什么？黑胶虫其实就是一种耐药的细菌！！这在细胞培养中是常遇到的问题，常用的双抗抗菌谱窄，特别是青霉素对一些耐药菌抗菌效力很差，如培养的各种用液被这种耐药菌污染，自然就会在培养液中大量繁殖，这没什么奇怪的。
第三，如何杀灭所谓黑胶虫，根据我的经验换两种抗生素就可以了，用广谱的氨苄或头孢和庆大配合完全可以杀灭这种细菌，在不行就用四环一定可以杀灭的，这是我亲身体验！！听说有的地方还专门卖杀灭黑胶虫的培养基，真是生财有道啊。有些人还说什么国内所有的实验室都被什么黑胶虫污染了，真是别有用心，同志们，当我的细胞被这种菌污染后，我查了很多资料，最后我判断它就是一种细菌，因为它能够被抗生素抑制，我换了抗生素解决了问题，现在我的细胞长得很好。
听说有人把杀灭”黑胶虫“的培养基申请专利了，那我也可以申请了，这可是发明阿，哈哈，可这有什么用呢，为了挣钱，却给国内的科研界带来多大的困惑！
总之，黑胶虫是一种细菌，我们完全可以抑制或杀灭它。
祝大家实验顺利。

作者: u234 时间: 2012-3-13 16:13

所谓的”黑胶虫“其实是多种，因为没有明确的定义，所以都把看到的“颗粒”称作”黑胶虫“。
目前已知的有：
1、硅颗粒，80年代全球都有报道，后经检测其成分99%为硅，怀疑是液体长期存放在玻璃瓶，导致硅颗粒的产生，所以把血清和培养液的瓶子都改为塑料的。
2、焦虫，寄生在牛的血细胞的寄生虫。

如果是细菌，那就不能称为”黑胶虫“。

作者: jrwyyplt 时间: 2012-3-13 16:13

比较认同dongwp的观点，只是不知道这种“焦虫”会在那些细胞系中寄生的。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-3-13 16:13

尊敬的版主：你好。可否给出几篇文献，我们彻底把这个问题搞清楚，奉献给大家。如果是牛血细胞的寄生虫它的繁殖效率高不，大概几天一代？另外请您把焦虫的英文名字展示一下，我想我们一定能找到克制它的方法。

作者: kewanqi2011 时间: 2012-3-13 16:14

如果是一种细菌，微生物专家应该会认识，除非是目前还没有被发现的新品种（这可能性大吗？）。所以我建议：现在正受该问题困扰的朋友，找找微生物专家给看看，即使是新种，专家应该可以给一个答案。

作者: duoduo 时间: 2012-3-13 16:15

实践是检验真理的唯一标准，如果大家碰到类似的问题，不妨一试，反正抗生素也不贵，我用的都是进口的，也就100多块钱，够用好一阵子啦！试好了，别忘了回来说一声，如果没效大家再共同想办法，真理总是越辩越明。

作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:15

细菌是可以看到的,放大400倍就可以看到了.如果那个细菌有鞭毛的话还可以看到在运动,我的细胞污染时我都看见的,而且一般数量较少时就能看到了

作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:16

我也同意楼主的意见,因为我的细胞从来都没有被黑胶虫污染,都是细菌或者真菌,所以我也一直不明白为什么老有人说被黑胶虫污染,今天才恍然大悟

作者: ROSE李 时间: 2012-3-13 16:17

我养的舌癌SAS细胞好像也是这种状况，我现在每次操作前都用生理盐水冲洗4遍，当时干净了，但是第二天马上又长满了。能麻烦doctorwyz告诉我具体广谱的氨苄或头孢和庆大或者四环的具体用法吗？比如什么时候加，加多少剂量吗？谢谢！

作者: 00无名指00 时间: 2012-3-13 16:17

赞
请问到底怎么判断是不是黑胶虫？有人告诉我他们是会动的，但是我的细胞里都是一个个的小黑点，不动的。按你的描述，细菌的话应该也是不动的，对吗？

作者: dotaaa 时间: 2012-3-13 16:18

我用的这个配方：头孢和庆大各50微克/ml，应该会有效果的。四环的毒性较大，量要再减少，具体用多少根据你的实验情况定。祝大家实验顺利。

作者: qqq111 时间: 2012-3-13 16:18

楼主说的那个黑东西是不是很小的黑色的点点啊？放大100倍的时候会看到有黑点点，很小很小，400倍下虽然也看不清，但是能看到那些东西在动，好像在游泳的样子。非常小。

作者: HPLC使者 时间: 2012-3-13 16:18

我养的293细胞在剧烈操作后（胰酶彻底消化掉瓶内细胞，再从其他瓶的293传入293细胞）出现过比较明显和严重的“小黑点”现象，但我持续培养和观察了一周，发现对细胞生长确实影响不大，我甚至还冻存了一些这种293细胞。如果真是细菌污染，为什么培养基始终较透明，没见到浑浊呢？且细胞的生长状态较好又如何解释？到底是不是细菌，恐怕我们还是要心存一些疑问。

作者: fei1226com 时间: 2012-3-13 16:19

不知道我这个是不是黑胶虫：第一，是黑色的；第二，是会游动的扭动的小虫子样生物！第三，血清过滤后这种污染率降低很多，但偶尔还会污染，比如，今天。呜呜呜~~~~我的细胞啊！

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作者: mickeylin 时间: 2012-3-13 16:20

不知道我这个是不是黑胶虫：第一，是黑色的；第二，是会游动的扭动的小虫子样生物！第三，血清过滤后这种污染率降低很多，但偶尔还会污染，比如，今天。呜呜呜~~~~我的细胞啊！

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个人觉得该图片上黑点就是所谓的'黑焦虫',但本人亦同意前面战友所说,细胞培养中根本没有什么黑焦虫,常见的黑点少数为血清中沉淀颗粒，显得培养基不干净。多数为细菌，就象上面图片中的。我曾在试验中对出现的“黑焦虫”进行培养，接种到LB培炎基上，结果发现有细菌生长。本拟对之进行详细的细菌种属鉴定，但因事放弃了。凭经验推测，主要为革兰氏阳性细菌，所以一般抗生素效果不好，难以清除。由于污染实验室的阳性菌通常致病力弱，所以见到细胞未受较大影响，但“黑点”繁殖太多时，因为竞争营养及产生代谢产物的缘故，细胞状态还是会变差。建议：
1.如果遇到这个东西，细胞能够重新复舒，强烈建议及早弃去污染了的细胞，以免同一培养箱中其他细胞被污染。我在作稳定表达细胞株快成功时遇到过这种情况，恨不忍心前功尽弃，结果加入3倍双抗以及庆大，还是没彻底搞掉，最终结果还是放弃，全部重头再来。
2.如果细胞很快要收集用于检测试验（比如转染后），而黑点不多，细胞状态尚好，可以每日用PBS多洗数次，加入高剂量双抗（不一定有效，因为污染细胞的弱毒性细菌还是很多种）
3.如果需要作转染，还是不宜用这种细胞，影响细胞状态较大，转染效果不好。

作者: duoduo 时间: 2012-3-13 16:20

图中箭头所示的黑点是死细胞吧？

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作者: duoduo 时间: 2012-3-13 16:21

这些黑点是什么？（10倍物镜）

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作者: duoduo 时间: 2012-3-13 16:21

同上图所示的黑点（20倍物镜）：

图片附件: 60387255.snap.jpg (2012-3-13 16:21, 49.79 KB) / 该附件被下载次数 8
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作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:21

图中箭头所示的黑点是死细胞吧？

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我觉得是死细胞。肯定不是微生物污染。

作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:22

同上图所示的黑点（20倍物镜）：

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兄弟，你做的是克隆化培养吗，稀释得这么厉害，细胞好少啊，我看像是污染了。

作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:22

个人觉得该图片上黑点就是所谓的'黑焦虫',但本人亦同意前面战友所说,细胞培养中根本没有什么黑焦虫,常见的黑点少数为血清中沉淀颗粒，显得培养基不干净。多数为细菌，就象上面图片中的。我曾在试验中对出现的“黑焦虫”进行培养，接种到LB培炎基上，结果发现有细菌生长。本拟对之进行详细的细菌种属鉴定，但因事放弃了。凭经验推测，主要为革兰氏阳性细菌，所以一般抗生素效果不好，难以清除。由于污染实验室的阳性菌通常致病力弱，所以见到细胞未受较大影响，但“黑点”繁殖太多时，因为竞争营养及产生代谢产物的缘故，细胞状态还是会变差。建议：
1.如果遇到这个东西，细胞能够重新复舒，强烈建议及早弃去污染了的细胞，以免同一培养箱中其他细胞被污染。我在作稳定表达细胞株快成功时遇到过这种情况，恨不忍心前功尽弃，结果加入3倍双抗以及庆大，还是没彻底搞掉，最终结果还是放弃，全部重头再来。
2.如果细胞很快要收集用于检测试验（比如转染后），而黑点不多，细胞状态尚好，可以每日用PBS多洗数次，加入高剂量双抗（不一定有效，因为污染细胞的弱毒性细菌还是很多种）
3.如果需要作转染，还是不宜用这种细胞，影响细胞状态较大，转染效果不好。

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我觉得楼上的分析比较有道理，你的细胞应该是被污染了，如果反复复苏总有这样的情况，建议你用一下我的那个配方，或许有帮助。另外补充一下，建议大家以后少用“黑胶（焦）虫”这个称呼，听起来挺恐怖的，哈哈。

作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:23

我养的293细胞在剧烈操作后（胰酶彻底消化掉瓶内细胞，再从其他瓶的293传入293细胞）出现过比较明显和严重的“小黑点”现象，但我持续培养和观察了一周，发现对细胞生长确实影响不大，我甚至还冻存了一些这种293细胞。如果真是细菌污染，为什么培养基始终较透明，没见到浑浊呢？且细胞的生长状态较好又如何解释？到底是不是细菌，恐怕我们还是要心存一些疑问。

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很可能胰酶不能完全消化去除的死细胞碎片沉积。

作者: remenb 时间: 2012-3-13 16:24

我在细胞培养中也见过这种东西，细胞室老师说是黑胶虫，去不掉
如果没有明显污染的话，建议继续培养
所以我想问楼主
如果是细菌的话，为什么这种“虫子”对细胞生长影响不大，甚至没什么影响

作者: wmp1234 时间: 2012-3-13 16:24

我在细胞培养中也见过这种东西，细胞室老师说是黑胶虫，去不掉
如果没有明显污染的话，建议继续培养
所以我想问楼主
如果是细菌的话，为什么这种“虫子”对细胞生长影响不大，甚至没什么影响

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你说的很对，任何微生物如果不是明显污染，对细胞生长的影响都不大，有些细菌在双抗的作用下繁殖能力降低，长得很慢，有些抗药性强的长得很快，这还和你的细胞养多久及换液或传代的间期有关。

作者: duoduo 时间: 2012-3-13 16:26

不是我将细胞稀释这么厉害，而是放置了比较长时间，细胞差不多没了，只剩下哪些圆圈中那样的黑点了。

作者: xueyouzhang 时间: 2012-3-13 16:27

我的细胞也有这种扭动的小虫子，随着细胞状态的变化而增加，细胞好时看不到，细胞状态下来它疯长，现在又有不动的小黑点，我的细胞都停下不敢养了，怀疑为血清问题，怎么解决阿？

作者: yueban-1147 时间: 2012-3-13 16:27

本人在进行细胞培养时发现细胞中污染了黑色的虫子（体积很小，在10x10的倍数下可见），该虫子能在细胞内寄生，而且能以极快速的速度有方向性的运动，氨苄青霉素和链霉素对之无效，更可怕的是本人在对自己痰检时，在痰液中也发现此快速移动的小黑虫子，求各位给予帮助

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