2,更多的是第二类假阳性克隆,主要来源于细胞密度和药物筛选浓度的不匹配。用于筛选稳定株的药物,多数是作用于代谢通路,而代谢通路对细胞的状态极其敏感,包括细胞之间的crosstalk,因此当使用不正确的细胞密度和药物浓度进行筛选,最容易得到假阳性,且这些假阳性如果重新按低密度铺盘,比如1/100,多数情况下无法生长,因此这些假阳性就耐药来说,也是假阳性。在实际操作中,这些克隆往往在6 well plates中恢复生长时,在筛选药物浓度下,无法扩增。
I do use a cancer cell line, so it should be genetically stable. And I think "off target effect" was unlikely since empty vector have the similar problem.
By the way, actually i used a lentivirus based plasmid for transfection (not infection). Will the random insertion or high copy insertion lead to this problem?作者: jrwyyplt 时间: 2012-3-15 17:42
2,更多的是第二类假阳性克隆,主要来源于细胞密度和药物筛选浓度的不匹配。用于筛选稳定株的药物,多数是作用于代谢通路,而代谢通路对细胞的状态极其敏感,包括细胞之间的crosstalk,因此当使用不正确的细胞密度和药物浓度进行筛选,最容易得到假阳性,且这些假阳性如果重新按低密度铺盘,比如1/100,多数情况下无法生长,因此这些假阳性就耐药来说,也是假阳性。在实际操作中,这些克隆往往在6 well plates中恢复生长时,在筛选药物浓度下,无法扩增。