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液相色谱反相C18柱分离样品 柱压很大
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作者:
BridgetJones
时间:
2012-3-16 15:10
标题:
液相色谱反相C18柱分离样品 柱压很大
反相C18柱分离多巴胺,柱子用一段时间后柱压很大,怎么解决
分离多巴胺,使用安捷伦C18柱,流动相是水相:有机相=7:3,水相为NaH2PO4 50mmol/L, EDTA 250mg/L, 十二烷基硫酸钠 500mg/L; 有机相为乙腈 200ml/L, 甲醇 100ml/L. 磷酸调pH2.9, 流速1.0ml/min. 刚开始每次用完用100%甲醇冲洗柱子。柱子使用过一段时间后,柱压变高,已经超过机子最大压力限制,用甲醇冲仍不减小,没有办法使用。现在改用不含SDS的同组分流动相冲洗20倍柱体积,水:甲醇+乙腈=7:3冲20倍柱体积,100%甲醇冲20倍柱体积,但压力仍不减小,怎么办?在网上查过,说用小流速反冲,但是商品柱能反冲吗,有没有影响,冲完还能不能用?求高人指点。
作者:
naren4545
时间:
2012-3-16 18:37
刚开始每次用完用100%甲醇冲洗柱子?你的盐已经析出阻塞色谱柱了!
作者:
小莲
时间:
2012-3-17 10:41
标题:
回复 #1 BridgetJones 的帖子
你这种情况,只能死马当活马医,小流速反冲了,用30%乙腈/水 0.1ml/min反冲2小时,然后把柱子正接,还用0%乙腈/水 0.1ml/min冲2小时,然后逐渐增加流速到日常水平。
以后做完样品应该用同比例无盐流动相冲洗半个小时,然后再用100%有机相冲洗封柱。
作者:
q_r_epcnge
时间:
2012-3-17 10:59
你用完直接用100%甲醇冲,肯定很多盐析出来了,堵住柱子了,应该做完样用小流速甲醇:水=1:9冲过夜,出去盐。
作者:
haohaorenjia
时间:
2012-3-17 11:00
可以反冲的,但是时间不能太长,对柱效有一定的影响。不过,我觉得就是反冲也不一定能冲出来了,还是考虑换柱子吧,肯定是以前的缓冲盐没有冲洗干净,越积越多,这些缓冲盐如果当时没有冲干净,以后费再大的力气都难冲下来了。
作者:
BridgetJones
时间:
2012-3-17 11:03
那现在用小流速甲醇:水=1:9冲过夜,还能把盐冲出来吗?这个柱子还有没有救呀?
现在如果用甲醇+水冲过夜,缓冲盐能冲掉么,这跟柱子是不是就报废了呀?
作者:
maomi520
时间:
2012-3-17 15:18
每次用完用100%甲醇冲洗柱子——操作有问题,应该先用大比例的水冲洗,以免缓冲盐析出。现在也只能先用90%左右的水冲洗,把盐洗出来了。
作者:
HEC_css
时间:
2012-3-17 15:20
你的流动相有盐类的缓冲,所以每次用完先用水冲洗柱子,才行。应该先用大比例的水冲洗,以免缓冲盐析出。现在也只能先用 水冲洗,把盐洗出来了。
作者:
dxkuii
时间:
2012-3-19 11:04
我觉得你的柱子和系统都应该好好冲冲,柱子反冲以后就要反着用了,用水和甲醇(水多甲醇少)一起冲冲吧。
作者:
shuimu0801
时间:
2012-3-19 14:13
建议用高水相小流速下先冲下,我现在用的一根岛津的C18的柱子,有时候正接超压反接就正常有时候又反接超压正接正常,所以我正接反接都用过,所以我倒是正接反接经常换着用,分离情况没受什么影响,不过不同的柱子可能不一样
作者:
Erica2088wr
时间:
2012-3-19 14:42
缓冲用盐的话,需要用高水来洗吧...
作者:
fu8u8
时间:
2012-3-19 15:08
是不是该换过滤器了,柱子最好不反接,有可能泵有问题。
赞一下
作者:
santa
时间:
2012-3-19 23:07
你们的液相没人管理吗,这可是低级错误,盐对机器的影响也很大的,特别是泵,建议不接柱子用纯水冲洗过夜,然后接上柱子用90以上的水低流速冲洗,时间长一点,看柱压有没下降,再不行就反接吧,还不行就是废了,把柱头拆开,把里面的填料挖一点出来,再装上试试,反正死马当活马医,自己也能多长点见识
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