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1:为什么接毒细胞孔中细胞大量死亡,基本无病毒稀释度的差异?是否是我的病毒稀释度还是不够?所以导致接毒细胞孔中的细胞成片死亡?或者还是观察时间过晚,病毒已经完全扩散开来了?
可能原因:
A. 琼脂温度太高了。
B. 该细胞系不适合做空斑
C. 观察时间比较晚(一般来说,第一次做,应该每隔12h观察一次)
D. 其他原因。
2:我搜了搜以前的帖子,看见有些用双层琼脂,这个是否是因病毒不同而异?
这个和病毒无关。加双层琼脂虽然麻烦些,但是有利于固定住空斑形状。
3:我想下一次实验,用营养琼脂覆盖细胞,但不加加中性红,每天观察细胞,待细胞出现病变后,在直接在琼脂上加中性红去染细胞,但不知道,在这种情况下,中性红使用浓度多大合适?染色多长时间?
你的预试验,应该重复这次空斑接毒的结果,将病毒按空斑方法同样稀释,每隔12h观察一次,体会细胞病变出现的时间、病毒的稀释度等等。
然后在下次做的时候,每个稀释度接种两个板。一个六孔板只做接毒试验,另外一个六孔板做空斑试验。如果再出现类似问题,肯定是某个环节有问题了。
你可以换换用其它染料。