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我们做的是股动脉内皮细胞原代分离,大体过程相似。说一下自己的意见,仅供参考。
1. 血管长度问题:由于动脉有分支,我们大多时候用1-2cm的动脉分离,分离出的细胞量有个体差异,但够用。你的脐带血管太长,消化不够充分,冲洗也相对困难。建议分成几段消化。
2. 消化过程:我们用胶原酶,37度,15-20分钟,期间抽推3次,保证消化充分。鉴于你血管两端均夹死,可以忽略此过程,但要保证酶消化充分。
3. massage 血管: 由于我们用t型通透管,一段联接针管,先将酶抽回针管,用无菌镊子分三个角度轻轻磨差血管,每个角度磨差完,将酶来回推抽两次,目的是为了让内皮细胞脱落。这个步骤比较关键,力道要适度。
4. 冲洗:用45ml冲洗液经通透口用力冲洗血管。此步骤也比较关键。3和4步骤保证收集到内皮细胞。
接下来就无关紧要了,不外乎离心,培养,换液。