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标题:[求助]关于脐静脉内皮细胞的原代培养

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

又遇到了一个群友啊，我的基本上，没有看到内皮细胞的样子，现在看基本都是碎片，我也没用明胶包被，其实不用也行，你用的什么消化的
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49888[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

养内皮养得超级郁闷，现在打算买细胞株了
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是I型胶原酶，0.1％的，消化15min,原代不铺板也长得很好，传代的时候最好铺一下，我觉得铺板以后明显贴壁的要多些；
双抗配什么配啊，买成品的就好啊
做原代要多摸索才行，我就是做到第五次才做成原代，第六次才传代也成功的，加油啊，群友们！
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做原代用哪一型比较好啊，我现在打算换成胶原酶或者混合
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在养的很顺利啊，就用I型胶原酶就行，0.1％的浓度，37℃消化15min！
我也不知道那些会动的小点点是什么，不过只出现一次，现在就没有了
我做原代的时候不需要明胶铺板也长得不错，但是传代的时候最好用明胶铺一下，我对比过，铺了还是好一些，当然要注意无菌操作了
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发表于 2012-3-21 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我每次分离细胞总会掺杂很多红细胞，感觉在冲洗的时候明明是冲洗干净的。如果掺杂大量的红细胞会不会导致内皮贴壁不好呢？而且我初次换液都是24h后，不知会不会也有影响呢？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得你的换液有问题，我看的文献基本都是24h以内，我每次都是在12h以内，因为内皮细胞据说是4h贴壁，实际上2h就有贴上的了，只是形态上还没那么伸展，你换液太晚有可能导致其他优势细胞的生长
另外取材的时候就应该注意轻轻挤压掉血管里的血，消化前要冲洗3次，再往里注胶原酶
希望对你有帮助
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flower-201[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恩，谢谢，我试试12h内换液效果怎么样，我都会冲洗很多遍，但是每次仍然会掺杂红细胞，应该是冲洗不够吧，之前还想看看有没有添加红细胞裂解液之类的去除红细胞，但是看文献也都没这样的说法，所以还是乖乖的冲洗好了
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

放心，好好冲洗一下还是管用的，另外我自己总结：在消化过程中轻柔的挤压一下脐带是非常必要的！这样的话细胞多成团的脱落下来，你们试试吧，相信会成功的！
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我发现第一天基本可以贴壁但是不牢，而且换液后会少很多。所以现在我提了之后在也不理它了三天以后再看。
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