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标题:[求助]关于脐静脉内皮细胞的原代培养

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上加了细胞因子了吗？我没有加，但用明胶包了瓶的
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实，我有一次用不加生长因子的培养液也培养成功了啊，只是长不了那么快而已。原代培养不用明胶包被也可以的，传代的时候铺板还是必要的
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xue258[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，你传代的时候是用0.25%的胰酶么？大概消化时间是多少啊？我前天重新分离了一次，现在48小时，已经铺满80%，感觉跟长疯了一样啊，得赶紧传代才行……但是之前传代的时候消化了两分钟结果细胞全部状态极差，没几天就全死完了，总觉得是笑话时间长了，是这样的么？


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发表于 2012-3-21 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的是什么培养基？
我也是0,25％的胰酶，一般一分钟到一分半吧，两分钟会不会太久？据说内皮细胞还是对胰酶很敏感的，尽量不要太久 0票
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

M199，加了20%FBS，还有VEGF
之前就是传代出现问题，所以这个步骤就感觉很紧张，我看有文献说用直接滴血清的方法终止消化，你是用10%培基终止还是什么呢？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你买了VEGF？多少钱，哪个公司的啊？
如果是明胶铺板，又是传代的话，细胞很难被消化下来，我也是用含有血清的培养基来终止消化的
我用的培养基是ECM，比较贵
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有加细胞因子，因为和我的后续实验相关，今天换了胶原酶感觉细胞贴壁好了很多，而且第二天就有点形态了。可能0.25%的胰酶损伤比较大。
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0.1%的胶原酶？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

就是说嘛，应该用胶原酶的，恭喜你哦！我做原代刚成功的时候也是欣喜万分！
I型胶原酶，0.1％的就可以
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小糖块[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是用胶原酶做原代的，但是现在传代的问题让我很头痛，做不好就浪费细胞
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