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标题:[求助]关于脐静脉内皮细胞的原代培养

gemei0115[使用道具]
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我看到有人用的脐带保存液加肝素的,加多少合适啊,浓度是多少啊?
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8princess8[使用道具]
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现在多使用肝素钠,医用的,0.125g/L
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2541[使用道具]
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脐带保存液你们都用什么呀,都用PBS吗?我用的生理盐水,一般从产科取出来就会开始试验,还用加肝素吗?你们培养液里加没加肝素,不加有影响吗?谢谢!
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8princess8[使用道具]
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我的都加了,没试过没加的,你的如果细胞状态好,那就不加嘛
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newway[使用道具]
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请问,你传代的时候是用0.25%的胰酶么?大概消化时间是多少啊?我前天重新分离了一次,现在48小时,已经铺满80%,感觉跟长疯了一样啊,得赶紧传代才行……但是之前传代的时候消化了两分钟结果细胞全部状态极差,没几天就全死完了,总觉得是笑话时间长了,是这样的么?

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请问你是怎么分内皮的呢?我是用0.25%胰酶消化7分钟,然后用完培冲洗终止消化,培养液是用EGM2。10%胎牛血清,加生长因子,但第二天只有小小的圆形细胞贴壁,而且基本不增殖,换次液细胞就少很多,内皮是不是基本没消下来啊?
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newway[使用道具]
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放心,好好冲洗一下还是管用的,另外我自己总结:在消化过程中轻柔的挤压一下脐带是非常必要的!这样的话细胞多成团的脱落下来,你们试试吧,相信会成功的!

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请问消化时要把它放到孵箱里吗?挤压是在胰酶充盈时挤压还是用培养液冲洗终止消化时挤压呢?
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不用胰酶啊,都是用胶原酶的,0.1%的,100ML差不多用4-5次。
挤压的时候动作要轻柔,我是消化15min,其间挤压2-3次,你试试吧,应该没问题!
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kswl870[使用道具]
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不用胰酶啊,都是用胶原酶的,0.1%的,100ML差不多用4-5次。
挤压的时候动作要轻柔,我是消化15min,其间挤压2-3次,你试试吧,应该没问题!

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请问胶原酶0.1%配置是不是将买来的100mg胶原酶加进100ml的PBS或者无血清培养基中啊?
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8princess8[使用道具]
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是啊,最好在过滤一下保证无菌才好
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one[使用道具]
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太好了,找到群友了。
超级郁闷,做了3次没一次成功的。请问消化时间过长也会收不到细胞么?我分别用了0.25%的胰酶+EDTA,0.25%的胰酶+0.1%胶原酶37°,30min,消化液离心后(1000rpm,10min)离心管底部都见到不到细胞,真奇怪了。求助!
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