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标题:[求助]关于脐静脉内皮细胞的原代培养

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看了这么多文献，最长消化时间也就是20min,你的消化时间也未免太长了吧？
此外，没有道理颗粒无收啊
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的细胞倒是养出来了,还没有鉴定就都死了,现在的这一个培养板里的,也不好,为什么这些细胞都集中在一块地方,我看着比较集中的地方都该传代了,而且漂浮着许多不贴壁的细胞,我都换了两次液还是没有洗干净,每次都用PBS洗了３遍，而且我觉得状态也不是很好．有没有好的办法解决这个问题呀！谢谢！
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是原代培养吗？我的细胞刚消化下来时是成团分布，可是没两天就全融合了啊
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发表于 2012-3-21 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的是原代培养，我的也是两天就长满了，现在传代也传不好，有时吹打不下来，有是消化过了，把细胞都吸走了，现在还有污染这一关。
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的经验就是千万不能加胰酶，用胰酶消化原代的话是不行的，细胞基本上是活不久，而且状态也不行。消化下来的细胞都会死的。
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发表于 2012-3-21 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那用什么消化呀
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发表于 2012-3-21 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是胰酶啊，没什么问题，细胞状态很好的。
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发表于 2012-3-21 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在每次传代都传不好,经常是吹打不下来,请问，你在传代方面有没有好的经验可以传授一下哦,我现在经常是一传完代细胞就不行了.你的细胞能传几代啊,你在几代的时候做的实验啊,我的细胞还没做鉴定呢,请问在鉴定方面有没有好的经验,谢谢.
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-3-21 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我传代的经验就是放入胰酶以后不要把胰酶吸出，让细胞飘起来，直接放入含有血清的培养基终止消化，吹打，吸出，离心，没问题的！
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发表于 2012-3-21 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢哦! 我现在也是基本上这么弄的,我觉得这个细胞贴壁还是挺牢的,每次消化完后,第二天看就会有很多漂着的细胞.现在做了两次免疫组化都没出结果,我用的抗体都是国产的,请问你做免疫组化有什么好的经验可以传授一下吗?
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