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我们实验室一般是先消化静脉平滑肌细胞,然后再取材动脉内皮细胞。
1、消化是用的二型胶原酶,一般是在培养箱里消化20min,期间还要间断的用手按摩下,即轻轻揉搓,翻转。
2、细胞离心不能速度太大,1000-1200rpm 5-10min吧。
3、一般情况下我们为了提高细胞的获得,会提前使用明胶打下底,PBS清洗三次即可。(FN有时候会用)
4、细胞的消化我们使用的也是胰酶,不过我们使用的是0.125%的,0.25%的消化后细胞状态不好。
5、动脉内皮细胞使用的是抽管的组织块法,也会用明胶打底的,清洗后,可以用FBS三滴左右浸润下瓶底。而且,一般情况下换用的培养基是要加入内皮细胞生在因子的。