细胞世界

我们想研究外周血中的TH1/2，CD4+CD25+Treg细胞的表达情况，明确外周血全身的获得性免疫的状态。
同样的指标在疾病局部粘膜组织中的表达情况，进一步研究全身和局部的T细胞之间的相关性。因为，我们很多本专业学者认为，我研究的疾病是一种LOCAL的免疫异常引起。
我还有问题想问问：
1、Iuduced Treg的培养是否需要IL-10或TGF-beta? 比如 tr1 ，有些文章中好像就跟普通的TH细胞一样，刺激后一起检查他们。
2、目前，Tr1 的指标CD4（CD3、8代替）+,CD25+,IL-4- IL-10+,是否正确？
3、IL-4荧光是不是标PE会好些？
4、如果想检查TH17，应该如何选择抗体？IL-17？

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首先同意上面说的，要先分离PBMC后用磁珠分选出所需要的细胞。

然后对于你的问题做一下回答：

1. 我做过Treg，但是没有进行培养，PMA和ionomycin刺激后检测，但是结果和没刺激的差不多，后来就直接测，没有刺激。

2. 对于Treg的表面标记日新月异，当初我用的是CD4+，CD25+，Foxp3+，后来有文献报道CD127之类的，这个还是得看发文章比较认可的是哪一种方法

3. 没有这个说法，只是PE，FITC，APC比较常用

4. 可以选择IL17，但是还要加上其他的表面标记，因为能分泌IL17的不止Th17

我们想研究外周血中的TH1/2，CD4+CD25+Treg细胞的表达情况，明确外周血全身的获得性免疫的状态。
同样的指标在疾病局部粘膜组织中的表达情况，进一步研究全身和局部的T细胞之间的相关性。因为，我们很多本专业学者认为，我研究的疾病是一种LOCAL的免疫异常引起。
我还有问题想问问：
1、Iuduced Treg的培养是否需要IL-10或TGF-beta? 比如 tr1 ，有些文章中好像就跟普通的TH细胞一样，刺激后一起检查他们。
2、目前，Tr1 的指标CD4（CD3、8代替）+,CD25+,IL-4- IL-10+,是否正确？
3、IL-4荧光是不是标PE会好些？
4、如果想检查TH17，应该如何选择抗体？IL-17？

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1、首先你要明确检测和诱导是两个完全不同的概念。如果你要检测外周血或者组织局部是否有Treg，不需要刺激，直接检测就可以。如果你想从初始T细胞诱导Treg，就需要加anti-CD3，anti-CD28和TGF-β。

2、再者你要明确不同的调节性T细胞的概念和分类，你想检测所有的调节性T细胞，还是nTreg、或者iTreg。你要根据你的实验目的确定下来，不要随便拿一个就算。一般检测外周血或者局部的调节性T细胞，多数是检测所有的调节性T细胞，最多分一下是nTreg还是iTreg。

3、你说的不错，一般情况下，检测细胞因子最好选择荧光较强的荧光素，PE和APC都是首选。

4、检测Th17，CD4和IL-17双阳性就可以了。

是检测CD4+CD25+FOXP3+ nTreg 细胞

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那你就直接去血分离PBMC后检测，不需要刺激的

是检测CD4+CD25+FOXP3+ nTreg 细胞

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CD4+CD25+FOXP3+是调节性T细胞的标志，包括nTreg和iTreg。

CD4+CD25+FOXP3+是调节性T细胞的标志，包括nTreg和iTreg。

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没有生长因子诱导下应该是nTreg吧？常规的PMA等刺激也能诱导iTreg

那要看你样品的来源是什么。

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如果来源于正常个体，那可能就是nTreg；但是如果来源于疾病模型或者患者，就可能是nTreg+iTreg。

就算是用磁珠分离也应该是先用ficoll 先分离了PBMC再用啊，难道直接把磁珠用在全血吗？这样不经MACS试剂的用量大增，还会有大量细胞，包括红细胞，通过分离柱，很容易就堵啊

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嗯，是的，但是不知道是用常规方法分离出淋巴细胞，还是要将T、B细胞分离之后，再用磁珠，就是不知道这样下来细胞的活性会怎么样？你以前做过这方面的实验没？到时候要请教你啊··