小中大我们想研究外周血中的TH1/2,CD4+CD25+Treg细胞的表达情况,明确外周血全身的获得性免疫的状态。
同样的指标在疾病局部组织中的表达情况,进一步研究全身和局部的T细胞之间的相关性。
我还有问题想问问:
1、Iuduced Treg的培养是否需要IL-10或TGF-beta? 比如 tr1 ,有些文章中好像就跟普通的TH细胞一样,刺激后一起检查他们。
2、目前,Tr1 的指标CD4(CD3、8代替)+,CD25+,IL-4- IL-10+,是否正确?
3、IL-4荧光是不是标PE会好些?
4、如果想检查TH17,应该如何选择抗体?IL-17?
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回复:
①诱导Tr应该加TGF-β,它是从的CD4+单阳性胸腺细胞的初始T细胞诱导外周CD4+CD25+FOXP3+Tregs必需的。你可设两组,一组未加,另一组加TGF-β,刺激培养后分别测定CD4+CD25+Tregs的表达。实验前看文献一定要看外文影响因子高的,对实验设计有益。这点非常重要!
②你选的Tr1的这几个指标不特异,结果出来可能会对你的研究帮助不大,你可查Th1分泌IFN-γ,可能这个指标更好些。
③无论是PE,还是FITC,它们仅是不同荧光的染料,标记的好与不好与染料的质量有关,进口的世界品牌公司的染料好。
④Th17细胞的检测应先上网查Th17细胞的特异性标记物,你选的IL-17也行,因为IL-17是它分泌的。两者结合的做,获得的结果更有说服力。