细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]如何分离外周血单个核细胞

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[求助]如何分离外周血单个核细胞

kewanqi2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76114
精华 2
积分 534
帖子 660
信誉分 104
可用分 4146
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
21
 
CD127或FOXP3,选哪个好? 前者可以不用破膜。CD4+CD25+CD127-标记Treg 是否成熟?

————————————

个人认为foxp3更成熟
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
22
 

用CD127会省事很多,筛选也方便啊
顶部
pencil菲[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75646
精华 1
积分 410
帖子 476
信誉分 102
可用分 3191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
23
 

Foxp3才是Treg的特异性标志,不是CD127。
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
24
 

但如果要回收的话,只能用CD4+CD25+CD127-
顶部
8964357[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76997
精华 0
积分 273
帖子 266
信誉分 100
可用分 2118
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
25
 
应用淋巴细胞分离液分离!想提高分离的纯度就应用免疫磁珠分离,但免疫磁珠分也得先用淋巴细胞分离液分离后,再过免疫磁珠,但用免疫磁珠分离时需要的细胞数相当多,才能分出实验用的细胞。
顶部
utt0989[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78340
精华 1
积分 660
帖子 975
信誉分 102
可用分 5663
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-28
状态 离线
26
 
我们想研究外周血中的TH1/2,CD4+CD25+Treg细胞的表达情况,明确外周血全身的获得性免疫的状态。
同样的指标在疾病局部组织中的表达情况,进一步研究全身和局部的T细胞之间的相关性。
我还有问题想问问:
1、Iuduced Treg的培养是否需要IL-10或TGF-beta? 比如 tr1 ,有些文章中好像就跟普通的TH细胞一样,刺激后一起检查他们。
2、目前,Tr1 的指标CD4(CD3、8代替)+,CD25+,IL-4- IL-10+,是否正确?
3、IL-4荧光是不是标PE会好些?
4、如果想检查TH17,应该如何选择抗体?IL-17?

————————————————————————————————————————————————————————————————

回复:

①诱导Tr应该加TGF-β,它是从的CD4+单阳性胸腺细胞的初始T细胞诱导外周CD4+CD25+FOXP3+Tregs必需的。你可设两组,一组未加,另一组加TGF-β,刺激培养后分别测定CD4+CD25+Tregs的表达。实验前看文献一定要看外文影响因子高的,对实验设计有益。这点非常重要!

②你选的Tr1的这几个指标不特异,结果出来可能会对你的研究帮助不大,你可查Th1分泌IFN-γ,可能这个指标更好些。

③无论是PE,还是FITC,它们仅是不同荧光的染料,标记的好与不好与染料的质量有关,进口的世界品牌公司的染料好。

④Th17细胞的检测应先上网查Th17细胞的特异性标记物,你选的IL-17也行,因为IL-17是它分泌的。两者结合的做,获得的结果更有说服力。
顶部