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标题:[讨论贴]超净台里的酒精灯,有害无益?

pengke1983[使用道具]
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我们公司在美国总部的实验室都是用酒精灯的。所以,所谓的美国式实验室不用酒精灯显然是片面的。关于超净台要不要用酒精灯应该具体问题具体分析。比如说,培养的时候需要炙烤,那显然需要酒精灯。如果不需要炙烤,那点酒精灯显然就是多余了。
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jrwyyplt[使用道具]
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看了大家的讨论,想再说几句:

1、美国的细胞培养实验室一般都设在普通的屋子里,我在美国差不多呆过5、6个实验室,也见过不少其他的实验室,还没有见过细胞培养室单独特殊建造的。相反我发现国内的不少细胞培养室单独按照无尘车间的要求建造。究其原因,可能是因为国内的空气中粉尘比较多,污染的可能大些,所以对培养室的建造上反而下工夫。另外可能是因为国内无尘车间的施工便宜。在无尘车间中培养细胞,毫无疑问会减少污染的机会。但其施工成本,以及维护成本(无尘车间的过滤系统是要定时清洗和更换的,我担心不少的实验室以为造好车间就万事大吉了),还有进出的不便利,是不是值得,有待探讨。

2、就我在国外细胞培养实验室和我们公司的细胞培养实验室工作的经验,细胞培养室不需要一个异常洁净的环境。一般来说,地板如果是光滑容易清洗的(地坪漆、大理石、瓷砖均可),墙面使用不会剥落粉尘的油漆,窗户一般不要打开。这样的房间,只要定期(1-2天)拖地,就足够达到需要的洁净度了,因为真正的洁净环境是在超净台内。

3、回到要不要使用酒精灯的问题。首先在超净台内使用酒精灯的目的显然不应该是产生一个无菌的气相,因为超净台内的气相本来就是无菌的,所以使用酒精灯的目的,就是把有可能在瓶口的细菌杀死。那么只要在瓶口有合适的保护,就不需要了。我们实验室一般使用的培养液瓶在灭菌的时候,都会在盖上包上锡泊纸,使用过程中拿下,用完后又包上。所以我们是不使用酒精灯的。

在我看来,使用酒精仍然是从以前超净台技术比较差,或者是从普通场合中的无菌操作(比如普通实验室中一些分子克隆的操作)延袭而来的。在细胞培养的超净台内并不需要。有人提到美国的实验室中也有人使用酒精灯的,我的观察是在美国实验室中使用酒精灯的人往往是年纪比较大的人,或者一些照搬他们技术的人。
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milkdog[使用道具]
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放置酒精灯是常规,还用讨论吗?
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fox_79[使用道具]
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问题的关键在于火焰消毒的方法和原理。细菌培养中使用的接种环或接种针需要使用火焰以加热到很高的温度,在这个温度下金属的接种环/针会变红,估计在1000摄氏度左右。多数实验室是使用本生灯来完成这种火焰消毒的。然而鉴于火焰消毒的不利因素,如干扰层流设备(laminar flow hood,即超净台)中的气流,并可能引起火灾,人们设计了无需火焰的电加热设备,开关在地面通过脚踏控制,消毒完后即可关闭。而在哺乳动物细胞培养中,显然没有像接种环/针那样需要加热到很高温度的情况。多数常规的操作只是将培养瓶口或镊子在火焰上晃动一两下,难以想象这样的消毒能达到足够高的温度以杀灭微生物。并且这种“任何东西都要烧一烧"的简单思想容易造成一些塑料制品的损害,比如一次性培养瓶/皿、移液器等。
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fox_79[使用道具]
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推荐搜索google,关键词如下
"laminar flow cabinet"
"laminar flow hood"
"flame sterilization"
以及google图片搜索,”cell culture"。
请保留双引号以获得精确结果。
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kewanqi2011[使用道具]
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最近集中在做细胞转染的试验,养了多种细胞,污染也时有发生,在追究其原因的过程中有幸拜读了此topic,受益非浅,小弟的意见是:
1. 在开启培养瓶、皿等lids时用酒精灯烧一下主要目的肯定不是消毒灭菌,因为一时间不够长,二温度不够高,小弟认为烧一下的目的主要还是使容器口的particls黏附在局部,不至于在细胞操作过程中误入容器内;
2. 国外实验室大多不用酒精灯,个人认为国外实验室的整体enviroment要比国内好的多,比如空气中尘粒少,人员走动少,入细胞培养室有固定的工作服,hood的档次和质量也很高,所以基本上可以不用酒精灯;
国情不同,做事的方式也应该有所差异,个人意见在国内做试验还是保留酒精灯比较妥当!
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c86v[使用道具]
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why would the flame create negative pressure, and how does the negative pressure prevent contamination?
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eric930[使用道具]
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国情不同,做事的方式也应该有所差异,个人意见在国内做试验还是保留酒精灯比较妥当!
完全同意楼上的!!
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zsxan1990[使用道具]
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我觉得还是快速操作比较好
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toy[使用道具]
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我们点不点灯都无所谓了,实验楼外墙搞装修,天天台面上跟刚刮过沙尘暴似的,一层土,晕.......
细胞室的无菌环境才是关键,其次是操作要熟练迅速,做好防护(口罩,手套)。
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