细胞世界

不知你做的是什么细胞系？我做的是SW480，之前几次都是转染后24h消化，严格计数，再种小室，但是问题是转染后24h，细胞也增殖了（其中有未转染上的细胞），用于侵袭的细胞不再是最初转染的细胞，这样能反映miRNA对细胞侵袭能力的影响吗？
我用的是公司合成的miRN***段，瞬时转染，起作用的时间应该是48h内，转染后再种小室，等待侵袭过程（应该要48h）， miRN***段的作用还能显现吗？请给予建议，谢谢！

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如果你用带荧光的miRNA，一般转染后6小时就可以检测到细胞内有大量的荧光。考虑到靶蛋白有半衰期，48小时检测应该是没错的，文献中大部分也是转染后48小时和72小时检测侵袭和凋亡等生物学行为的改变的。因为miRNA mimic的对照细胞也同时在增值，所以检测的作用当然能显现。你做的结果如何呢？

我想做趋化因子对肿瘤的趋化作用，请问如果transwell上下室的培养基成分不同，会不会通过中间的膜相互渗透，下室的趋化因子会不会进入上室。

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会的，所以迁移时间一般在24h内

不同品牌的matrigel浓度不一样，hzbchc战友可否提供是哪里来源的matrigel？谢谢分享！

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BD的matrigel,货号356234（Basement Membrane Matrix）。铺胶后放到细胞培养箱了，明天去看成胶了没有。

我想在insert里接种混有成纤维细胞的胶原，希望形成凝胶构成三维培养，关于不同coating和孔直径的选择，楼主有什么好的建议吗？（btw，东方朔，经常看到你活跃在丁香园，算是陌生的老朋友了）

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欢迎陌生的老朋友来一起交流。个人看法：如果只是考察下腔因素对上腔内成纤维细胞的三维生长的作用，孔径选择0.4微米。如何包被好像不是太重要。

欢迎讨论。