细胞世界

大家好，我希望我要研究的细胞长在膜的上下两侧，这两种细胞都是贴壁细胞，如何让下层的细胞贴在膜上而不是六块板底呢？不甚感激！

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可以先把transwell小室倒置，细胞悬液滴在滤膜的下腔面，待4-6小时后，细胞已经基本贴壁牢固，然后再把小室正常放置到六孔板内，在滤膜上面种上另外一种细胞即可。

版主您好：我想用coning公司的transwell小室做做肿瘤细胞实验，包括粘附、迁移、侵蚀、成血管检测，想请问这些实验都可以使用transwell小室吗？他们之间的操作有什么区别啊？谢谢

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transwell的应用范围很广，您可以从下面的表格里面看到其应用的例子：

常用的操作的差别如下：1、细胞共培养试验
通透膜的孔径小于一定尺寸，细胞无法通过而培养基可以自由流动，因此，可以借助一定孔径的tranwell进行共同培养试验，考察无细胞接触时，分泌性因素对不同的细胞的作用。
2、细胞趋化试验：
根据细胞的大小选用不同孔径通透膜的transwell小室，上腔内的细胞可穿过膜进入下腔，如果是悬浮细胞，则对进入下腔的细胞计数，如果是贴壁细胞，则用棉签擦去通透膜上腔面的细胞，然后对通透膜下腔面的细胞进行染色，然后计数。进入下腔的细胞量可反映下腔内的细胞或者是因子对上腔细胞的趋化能力。
3、细胞迁移试验：
与细胞趋化试验相似，常常在上腔种上细胞，下腔加入特定的趋化因子、药物或者是血清，细胞会向有趋化作用的因子所在的下腔迁移，对下腔的细胞计数，分析，观察细胞的迁移能力。
4、肿瘤细胞侵袭试验
transwell侵袭实验就是在transwell的通透膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，细胞要把部分基质分解才可以通过通透膜，到达有含有趋化因素的下腔。

我还想请问一下boyden chamber实验和迁移、侵蚀实验的区别？他们只是名字的不同吗？

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boyden chamber实验是检查肿瘤迁移，侵袭试验的方法之一，具体操作：首先将Matrigel胶置4℃融化，并用无血清培养基将稀释混匀，用枪尖涂到至Boyden小室的上室聚碳酸酯膜上，整个操作在冰上及无菌条件下进行。涂好后移到37度，此时Matrigel已经形成胶。在Boyden小室的
下室内加入趋化因子，上室加入肿瘤细胞，放于培养箱内，分别在不同时间点（2h,4h,6h，8h,等）检测。弃去上腔中的培养液，并用棉签擦去滤膜上腔面细胞，染色，计数，拍照。
附上Boyden小室的图片。

请问您的实验目的是什么呢？是考察细胞分泌因素或者表明分子之间的调节作用吗？人脐静脉内皮细胞分离培养扩增都不需要用基质胶的，直接种即可。如果是考察细胞分泌因素的作用，可以一种细胞种板底，一种种滤膜上腔面，如果还想考察接触因素，可以把细胞分别种在滤膜的两面。直接把细胞混养好像不太合适。

版主您好：我现在在用coning公司的transwell小室做对单核细胞的趋化等，特向您请教：目前预实验用单核细胞系THP-1细胞做趋化，这个细胞没有用PMA诱导是悬浮细胞，趋化结束后发现膜下面也有少许细胞附着，这些细胞需要计入进入下室的总细胞数吗？对于这类悬浮细胞，进入下室的细胞计数方法有什么好办法呢？可以用MTT来计算吗？另外你对于贴壁细胞用DAPI染色，染色前用的是纯甲醇固定吗？非常感谢！

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非常高兴能和您共同学习。
1、膜下面也有少许细胞附着，这些细胞需要计入进入下室的总细胞数吗？
个人认为如果这部分细胞数量所占比例较少，而且不是实验设计中的考察因素，那么可以视为各组的均一背景，不计数。
2、对于这类悬浮细胞，进入下室的细胞计数方法有什么好办法呢？可以用MTT来计算吗？
一般就是进行直接细胞计数或者采用流式分析和计数，用MTT间接分析也可以。
3、另外你对于贴壁细胞用DAPI染色，染色前用的是纯甲醇固定吗？

请问您的实验目的是什么呢？是考察细胞分泌因素或者表明分子之间的调节作用吗？人脐静脉内皮细胞分离培养扩增都不需要用基质胶的，直接种即可。如果是考察细胞分泌因素的作用，可以一种细胞种板底，一种种滤膜上腔面，如果还想考察接触因素，可以把细胞分别种在滤膜的两面。直接把细胞混养好像不太合适。

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我想研究肿瘤细胞分泌的因子对内皮细胞刺激作用，促进内皮细胞在基质胶上形成血管的研究，要用到共培养，想问问怎么样设计细胞的位置？