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标题:[讨论帖]Transwell技术答疑

园丁##[使用道具]
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版主您好:
已经确定要做肿瘤细胞的侵袭实验,您的这个帖子真是个及时雨,之前也看了很多有关Transwell的帖子,有所收获,但是因为左说纷纭,每个人的protocol并不是一致,所以想请教您几个问题。
第一,是否可以选择coring的transwell货号(3422)做侵袭实验?transwell3422是否要包胶?代理商说不需要,但是看了很多文章还是需要包matrigel的。
第二,BD的matrigel有很多货号,比如356234(Basement Membrane Matrix)和356230(Basement Membrane Matrix, Growth Factor Reduced),不知如何选择?
有人说matrigel原胶是50mg/ml,但是就没看到BD说明书上描述胶的浓度,只是告诉5ml。
第二,稀释比列有人说1:2,1:4,1:8,个人感觉总得来说1:4多些。
第三,24孔板的每个transwell小室放多少微升胶,我看有的人说加了再吸出来,个人倾向加30微升,37°培养箱过夜干燥。
刚接触Transwell的侵袭实验,对此很陌生,因为做一次成本比较高,所以比较谨慎,不知您对我的问题有何见解,谢谢!

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非常感谢您的问题。
正如您所说,每个人的protocol并不是一致,所以就您的问题谈一下个人观点。
个人认为3422做侵袭还是要包matrigel胶的。
356234里面包括了一些细胞因子如TGF-beta,FGF等,如果你的实验就是要考察一些相关的因子的作用,要考虑到这一点。356230里面去除了大多数细胞因子,避免了matrigel胶的因素影响结果。
的确,BD没有告诉具体浓度,一般是按照比例稀释,如果想了解,可以接触他们技术支持,稀释比例也涉及到个人习惯,个人感觉如果太浓,胶容易不平,4倍或8倍都可以接受。
BD的matrigel胶不便宜,而且胶太厚了也不好用,所以以薄薄覆盖为宜,20-30微升都可以。

欢迎多交流。
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问个小问题
使用白色膜做实验怎么观察,用哪种染色?特别是苏木精染色能染上吗?Ehrlich苏木精?
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hulu呼噜[使用道具]
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非常感谢版主讲解,感觉你是道中高手啊!轻描淡写,四两拨千斤!心中有数了!
再问个弱智问题,水化时和上室加细胞悬液是用无血清培养基还是1%血清培养基,下室用20%的培养基可否?
再次感谢!
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园丁##[使用道具]
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回复 #43 hulu呼噜 的帖子

感谢您的问题。
个人觉得水化和上室加细胞悬液以1%的BSA为好,下室趋化一般用5-10%的FBS,如果您的细胞趋化能力强,浓度可以低些,反之,FBS浓度可以高些,所以最好查文献,看看您的细胞特性,或者,做个预实验。
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园丁##[使用道具]
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问个小问题
使用白色膜做实验怎么观察,用哪种染色?特别是苏木精染色能染上吗?Ehrlich苏木精?

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染膜的方法很多:包括苏木素染色及其各种改良法、结晶紫染色、Giemsa染色、伊红染色和台盼蓝染色等等。个人觉得DAPI染色,荧光显微镜下看,效果比较好。
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hulu呼噜[使用道具]
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再次感谢版主的解答。请问版主,1%BSA是bovine serum albumin(牛血清白蛋白)吗?有的文献是说0.1%的BSA,也就是100ml的培养基中加0.1克的BSA了?
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笑弯了腰[使用道具]
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近期准备做Transwell 观察药物对小鼠骨髓来源的树突状细胞迁移的影响
因为周围没什么人做过 想请教一下 该选用什么材料的孔径多大的膜
谢谢 树突状细胞是悬浮生长的
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请问,心肌细胞株和预处理过的MSCs共培养,想研究预处理过的MSC的旁分泌作用对心肌细胞凋亡的影响。transwell,共同培养基,所以不知道会不会有双侧渗透的细胞因子影响?如何避免呢?
还有,我想问一下是不是上为干细胞,下为心肌细胞呢?
谢谢您。
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BSA就是牛血清白蛋白,0.1%到1%都有人用的,具体要看你的实验体系。
加了BSA以后,要用0.22um的滤膜过滤一下。
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windy+++[使用道具]
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问个小问题
使用白色膜做实验怎么观察,用哪种染色?特别是苏木精染色能染上吗?Ehrlich苏木精?

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我们一般用结晶紫染色
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