小中大版主您好:
已经确定要做肿瘤细胞的侵袭实验,您的这个帖子真是个及时雨,之前也看了很多有关Transwell的帖子,有所收获,但是因为左说纷纭,每个人的protocol并不是一致,所以想请教您几个问题。
第一,是否可以选择coring的transwell货号(3422)做侵袭实验?transwell3422是否要包胶?代理商说不需要,但是看了很多文章还是需要包matrigel的。
第二,BD的matrigel有很多货号,比如356234(Basement Membrane Matrix)和356230(Basement Membrane Matrix, Growth Factor Reduced),不知如何选择?
有人说matrigel原胶是50mg/ml,但是就没看到BD说明书上描述胶的浓度,只是告诉5ml。
第二,稀释比列有人说1:2,1:4,1:8,个人感觉总得来说1:4多些。
第三,24孔板的每个transwell小室放多少微升胶,我看有的人说加了再吸出来,个人倾向加30微升,37°培养箱过夜干燥。
刚接触Transwell的侵袭实验,对此很陌生,因为做一次成本比较高,所以比较谨慎,不知您对我的问题有何见解,谢谢!
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非常感谢您的问题。
正如您所说,每个人的protocol并不是一致,所以就您的问题谈一下个人观点。
个人认为3422做侵袭还是要包matrigel胶的。
356234里面包括了一些细胞因子如TGF-beta,FGF等,如果你的实验就是要考察一些相关的因子的作用,要考虑到这一点。356230里面去除了大多数细胞因子,避免了matrigel胶的因素影响结果。
的确,BD没有告诉具体浓度,一般是按照比例稀释,如果想了解,可以接触他们技术支持,稀释比例也涉及到个人习惯,个人感觉如果太浓,胶容易不平,4倍或8倍都可以接受。
BD的matrigel胶不便宜,而且胶太厚了也不好用,所以以薄薄覆盖为宜,20-30微升都可以。
欢迎多交流。