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标题:[讨论帖]Transwell技术答疑

lixi559[使用道具]
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非常感谢您提供的信息,结合您前面的帖子,个人有几点疑问:
您是做细胞迁移试验还是侵袭试验?
用的是transwell还是Boyden小室?
准备铺胶原还是matrigel胶?
用的是肿瘤细胞还是?

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因为问的东西多,所以有点乱,我的回答是:
1、我想做细胞迁移、侵蚀、成血管实验都做;
2、我想用transwell小室做,但发现boyden小室也可以,不知道他们之间的区别,哪个好?迷 茫中...
3、我胶原和基质胶都要铺,用在成血管试验中,就像你描述的,transwell小室的一面种内皮细胞,一面种肿瘤细胞;
4、当然主要是用肿瘤细胞来做实验。
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cocacola[使用道具]
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transwell小室、boyden小室和millicell有什么区别?
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33号[使用道具]
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你好,我想请教,最近看了篇文献讲应用transwell侵袭实验筛选出转移能力强的肿瘤细胞,通过十轮的transwell侵袭实验,最终从原始肿瘤细胞系筛选出高转移能力的亚系。请问,如何在transwell侵袭实验后收集细胞继续培养而不污染?
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园丁##[使用道具]
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近期准备做Transwell 观察药物对小鼠骨髓来源的树突状细胞迁移的影响
因为周围没什么人做过 想请教一下 该选用什么材料的孔径多大的膜
谢谢 树突状细胞是悬浮生长的

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呵呵,原来是DC同道,个人用的是5微米的膜,透明不透明都可以。
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园丁##[使用道具]
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请问,心肌细胞株和预处理过的MSCs共培养,想研究预处理过的MSC的旁分泌作用对心肌细胞凋亡的影响。transwell,共同培养基,所以不知道会不会有双侧渗透的细胞因子影响?如何避免呢?
还有,我想问一下是不是上为干细胞,下为心肌细胞呢?
谢谢您。

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感谢您的问题。个人理解:transwell培养的时候,MSC和心肌细胞共同培养的作用,应该是一种cross-talk式的作用,及MSCs分泌的因子作用于心肌细胞,而心肌细胞分泌的因子也反作用于MSC。如果您只想考察MSCs的分泌性因素对心肌细胞的作用,应当收集MSCs的培养上清,超滤,然后添加到心肌细胞培养体系中。
至于MSCs和心肌细胞谁上谁下,好像不重要,除非您的实验目的有特殊要求。
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tianmei001[使用道具]
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呵呵,原来是DC同道,个人用的是5微米的膜,透明不透明都可以。

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呵呵 巧了巧了 是不是就直接对下腔的细胞计数 用细胞计数板吗?
谢谢
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因为问的东西多,所以有点乱,我的回答是:
1、我想做细胞迁移、侵蚀、成血管实验都做;
2、我想用transwell小室做,但发现boyden小室也可以,不知道他们之间的区别,哪个好?迷 茫中...
3、我胶原和基质胶都要铺,用在成血管试验中,就像你描述的,transwell小室的一面种内皮细胞,一面种肿瘤细胞;
4、当然主要是用肿瘤细胞来做实验。
不知道我这样回答是不是连贯一点了?

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感谢您的问题。
transwell和boyden的结构大都是滤膜、上腔和下腔,如果非要说哪个好,个人感觉transwell的种类多一些,可选余地大;
一般包被胶原主要是方便细胞的粘附,而transwell大都经过特殊处理,个人感觉细胞贴附很好,当然每个个人习惯和试验目的不一样,
做内皮成管是要铺matirgel胶的,和铺胶原的目的不一样;

以上仅仅是个人看法,具体实验设计要和您的实验目的结合,要和导师一起定。
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transwell小室、boyden小室和millicell有什么区别?

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直接一点说,这三者都是带孔的滤膜及其分隔出来的上腔和下腔。Corning管他们的产品叫transwell,millipore管他们的叫millicell,这两者都是一种类似于小杯子状的结构,都要配合培养板使用,boyden是一种独立的小室。
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你好,我想请教,最近看了篇文献讲应用transwell侵袭实验筛选出转移能力强的肿瘤细胞,通过十轮的transwell侵袭实验,最终从原始肿瘤细胞系筛选出高转移能力的亚系。请问,如何在transwell侵袭实验后收集细胞继续培养而不污染?

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感谢您的问题。
这篇文献很有意思,您方便贴出来看看嘛?
收集细胞可以用胰酶消化,无菌操作即可。
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园丁##[使用道具]
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呵呵 巧了巧了 是不是就直接对下腔的细胞计数 用细胞计数板吗?
谢谢

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可以用计数板直接计数,也可以用流式计数。
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