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标题:[讨论帖]Transwell技术答疑

toy[使用道具]
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正好在此问一个问题:我在做表皮细胞的复层培养,需要气液界面培养方法,不知气液界面培养时,transwell下面的6孔板准确一些需要加多少培养液?2ml?
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3648755[使用道具]
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BSA就是牛血清白蛋白,0.1%到1%都有人用的,具体要看你的实验体系。
加了BSA以后,要用0.22um的滤膜过滤一下。

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多谢版主的回答,不知怎么个具体看实验体系?我的实验体系就是做肿瘤细胞Transwell侵袭实验,上室铺matrigel胶然后加肿瘤细胞,下室加10%FBS的培养基。
还有一个问题就是matrigel是无菌的吧,用无菌的培养基稀释,凝固了水化后直接可以用吧?
初次做Transwell,不敢贸然下手,多谢指导!谢谢!
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toy[使用道具]
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多谢wlnju的回答,不知怎么个具体看实验体系?我的实验体系就是做肿瘤细胞Transwell侵袭实验,上室铺matrigel胶然后加肿瘤细胞,下室加10%FBS的培养基。
还有一个问题就是matrigel是无菌的吧,用无菌的培养基稀释,凝固了水化后直接可以用吧?
初次做Transwell,不敢贸然下手,多谢指导!谢谢!

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matrigel是无菌的,稀释后就直接铺板即可!
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正好在此问一个问题:我在做表皮细胞的复层培养,需要气液界面培养方法,不知气液界面培养时,transwell下面的6孔板准确一些需要加多少培养液?2ml?

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我发现Coring的六孔板transwell下腔加1.5ml就能达到滤膜了,2ml当然也可以。
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toy[使用道具]
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刚转到这个领域,我还真没找到标准答案,2ml过了不知会不会影响气液界面培养的效果(底层的培养液会不会漫过细胞面?)。
如果1.5ml可以还是应该用1.5就够了
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redbutterfly[使用道具]
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我有个问题,请问下种板时怎么样种的均匀呢?我染了膜后经常看到穿过的细胞呈团状
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shenkunjie[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 redbutterfly 于 2012-4-7 13:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我有个问题,请问下种板时怎么样种的均匀呢?我染了膜后经常看到穿过的细胞呈团状

是不是考虑不是穿过来呈团状,而是种下去的时候就是团状?
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xue258[使用道具]
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我想做肿瘤细胞的迁移,用corning的24孔板,滤膜8μm里面有12个小室那种。看了园子里挺多帖,大家好像都没说一般每个处理组要几个平行孔,我要比较四到五种细胞的迁移能力,这能在一块板上完成吗?还有,我的细胞是贴壁细胞,理论上穿过膜后应该会贴在滤膜下表面,但也无法完全排除部分细胞掉落在下室的可能,这时该怎么计算迁移率呢?谢谢!
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的确,如您所说,气液面培养如果漫过细胞面会妨碍氧的摄取和二氧化碳的弥散,影响细胞的赠殖分化,您可以在1.5-2.0ml之间找一个比较理想的量。
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园丁##[使用道具]
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我想做肿瘤细胞的迁移,用corning的24孔板,滤膜8μm里面有12个小室那种。看了园子里挺多帖,大家好像都没说一般每个处理组要几个平行孔,我要比较四到五种细胞的迁移能力,这能在一块板上完成吗?还有,我的细胞是贴壁细胞,理论上穿过膜后应该会贴在滤膜下表面,但也无法完全排除部分细胞掉落在下室的可能,这时该怎么计算迁移率呢?谢谢!

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感谢您的问题。
每个处理组都要设复孔的,一般至少三个。
的确,随着时间的延长,会有少部分细胞掉到下腔去,不过Corning的膜都经过处理,有利于细胞贴附的。也有人包被胶原来增加细胞贴附。
另外,如果各组都是用的同样的transwell,而掉的细胞量又比较少, 可以视为背景误差,一般不影响趋势。
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