细胞世界

请问做药物转运的时候Transwell需要基质胶包被吗？实验的目的是使细胞在滤膜上形成致密单层，然后考察药物从顶层到底层或者反方向的转运量。根据文献有用人胎盘胶原、鼠尾胶原等包被的。，也有没有提到需要包被的，所以很疑惑。目前板子已经买了，但是暂时还没用，并且还有一个问题是这个板子成本高，实验使用次数有限，所以对于怎样提高成功率不知您是否有些建议？谢谢

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你拿其中一块板作练习,用完了把细胞消化下来,多洗两次,再拿酒精泡一泡,紫外灯下照一照,又是一块新的板!哈哈!够你练手用了

感谢您的问题。
二十四孔板的上腔比较小，确实是细胞容易聚集在中间，可以试着种完了细胞轻轻吹一下。
冷PBS的确容易使细胞收缩，掉下来，但是却不至于完全把细胞洗没了，您可以看看是否是其它的因素如迁移时间过长等导致的这个结果。

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您觉得迁移时间过长会导致细胞脱落,这个我不太赞同,因为更长的时间只能是细胞黏附更加紧密,不知道您有何高见?

斑竹您好：开展这个栏目让我们做transwell小室实验的初学者受益匪浅，谢谢！请教：我做miRNA对癌细胞侵袭能力的影响，我是在小室上室种好细胞，过几个小时再将miRN***段及脂质体形成的转染混合液加入上室细胞悬液，还是在12孔板里转染后24h消化细胞，计数后再种小室？前者操作，下室含胎牛血清的培养液会不会渗透到上室，稀释转染混合液？后者操作，会不会干扰因素太多？
再请教：铺好基质胶稀释液（Matrigel：RPMI 1640=1:4）,成胶后，种上细胞，24-48h仍然很多悬浮细胞，而且数个聚集成球状？为什么很难贴壁？平时消化后种板很容易贴壁的！
致谢！

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个人认为应该转染后消化再做transwell，我做过miRNA悬浮转染和种板后转染，感觉不好控制消化后的细胞状态，如果消化把握不好，首先转染效果就更不好了，何谈侵袭呢？

你拿其中一块板作练习,用完了把细胞消化下来,多洗两次,再拿酒精泡一泡,紫外灯下照一照,又是一块新的板!哈哈!够你练手用了

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真的吗？这样也可以啊，那我就不用发愁了哈，多谢多谢！

楼主你好，最近打算做干细胞与体细胞共培养研究干细胞分化
据我说知，Transwell可以做分层培养，细胞直接不直接接触，但是所分泌的细胞因子可以自由交换，这样属于indirect cell to cell contact，有文献报道indirect cell to cell contact不能诱导干细胞向体细胞分化，请问用Transwell（或者是你们公司其他什么产品）可以做direct cell to cell contact吗？

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transwell可以部分“direct cell to cell contact”，先把一种细胞种在transwell膜的下腔面，待其贴壁后，再在上腔面种上另外一种细胞。

您觉得迁移时间过长会导致细胞脱落,这个我不太赞同,因为更长的时间只能是细胞黏附更加紧密,不知道您有何高见?

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哈哈，我说的是穿过了滤膜达到下腔面的细胞有可能因为时间长而进入下腔。见仁见智吧。

计数5-8个视野，肯定不能绝对定量下层细胞准确数，所以在求迁移率的时候，那个公式迁移率（%）=（下层细胞数/添加的细胞数）×100%；中的下层细胞不知怎么算

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对于悬浮细胞，可以采用迁移率（%）=（下层细胞数/添加的细胞数）×100%；

可是对于贴壁细胞情况就不太一样了。的确，对于穿过了滤膜到达下腔面的细胞取几个视野进行计数只是一种相对计数。
如果是追求绝对计数，那恐怕只有把上腔面的细胞擦掉，再把滤膜中的细胞消化出来了，不知道有没有群友在文献中看到这种方法？