[求助]关于激光共聚焦样品的制备 - 经验共享

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标题:[求助]关于激光共聚焦样品的制备

c86v[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教啊，做共聚焦反反复复要用PBS洗十几次，怎么样才能染细胞更好的贴在片上，因为我的是悬浮细胞？

guagua[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问有人做过组织切片的共聚焦样品吗？应该如何准备？谢谢

HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做的是贴壁细胞的激光共聚焦钙离子浓度检测，是将细胞培养在6孔板里，不知是否不用爬片，直接在显微镜下观测？

is2011[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我最近也要做贴壁细胞的激光共聚焦图片，想问一下，我主要是看一下，肿瘤细胞经抗肿瘤药物作用不同时间段的凋亡情况，请问我要用PI ，RNA酶处理细胞，然后用激光共聚焦显微镜观察，可以吗？就是做流氏的试剂。谢谢高手指教！

dog002[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做过confocal，我个人觉得用confocal来看细胞的亚结构非常好。我用的OLYMPUS的FV1000,我看过说明书介绍，confocal可以做离子浓度的测定，但是我没有做过。组织的切片一样可以做confocal,我的一个朋友就是做的组织，方法和做细胞的荧光一样，结果不错。
我当时做的是细胞的免疫荧光，方法和基本的免疫荧光一样，细胞种在载玻片上，60%融合就好，不要长满，因为细胞太多，挤在一起的话，会影响成像。一抗，荧光二抗，依次孵育。我把我毕业论文中的一张图贴上来给大家看看。我做的是双染，一个抗体用的FITC（绿色），是一种微管蛋白；另一个用的是TRITC，是一种结构蛋白。黄色是两种融合的图像，结果发现这两种蛋白结构上共地位。

附件

2012-4-9 14:47

56525777.snap.jpg (43.46 KB)

dog002[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

红色，TRITC

附件

2012-4-9 14:48

61238223.snap.jpg (38.84 KB)

dog002[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

黄色，融合像。confocal 可以自动运算，形成融合像。

附件

2012-4-9 14:48

20661005.snap.jpg (60.05 KB)

8964357[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问楼上的大侠，做confocal来看细胞的亚结构一定要用FITC 染色吗？请问有人用过PI 染色吗？就是用流式的PI RNA酶。用这种染色可以吗？请指教啊啊谢谢啦！！！

dog002[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回答楼上的，当然不是非要用FITC啊。我在奥林巴斯总部做confocal的时候，看见墙上贴了一张图，好像有几十种染料都可以做的，发出的颜色是不同的。由于太多，我没看清楚PI是不是可以。你用FITC或罗丹明多好啊，这些是很常用的染料。如果你用很特殊的染料，需要用特殊的滤片的，不知道人家是否有。
我刚查了一下olympus FV1000的网站，没看到染料的问题。可能是我没仔细看。
你自己找找看，是否有你需要的信息。
cuturl('http://www.olympuschina.com/life/product/product_pro_368997.html')
另外，你可以直接联系奥林巴斯德技术支持，人很好的。
希望对你有用。

00无名指00[使用道具]
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发表于 2012-4-9 14:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问有人做过组织切片的共聚焦样品吗？应该如何准备？谢谢

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我也想问此问题，敬请高手指点！我们做组织切片可以用激光共聚焦么？如果可以用，对切片和载玻片有什么要求？谢谢！

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