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标题:[求助]fluo-3测钙,激光共聚焦标本

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有，请问如果细胞爬片，然后制片，这个制片的过程和普通组织制片的过程一样吗？有什么需要特别注意的地方？谢谢！
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你们的fluo-3，am都是在哪家公司买的啊 规格和价钱怎么样？
我现在急着买 但不知道在哪儿买 找了一家碧云天的 他们有20ul包装的 卖469元 这算贵还是便宜啊？
还有他的产品说明上面说"本Fluo-3 AM (钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存液，浓度为5mM'意思是不是说买回来就直接用d-hanks液稀释就可以了啊？
谢谢
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发表于 2012-4-9 19:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，用含有钙的Hanks液配置Fluo-3 AM，对试验结果有影响么！是不是尽量避免外源性的钙离子比较好啊？虽然知道Fluo-3 AM是在细胞内被酶分解为Fluo-3而激发显色，但是还是不敢确定.请高手解答！谢谢
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发表于 2012-4-9 19:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你们的fluo-3，am都是在哪家公司买的啊 规格和价钱怎么样？
我现在急着买 但不知道在哪儿买 找了一家碧云天的 他们有20ul包装的 卖469元 这算贵还是便宜啊？
还有他的产品说明上面说"本Fluo-3 AM (钙离子荧光探针) 是配制于无水DMSO (anhydrous DMSO)中的储存液，浓度为5mM'意思是不是说买回来就直接用d-hanks液稀释就可以了啊？
谢谢

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他们应该是分装Invitrogen公司的。
价格还可以吧。
第三问，是的。
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，用含有钙的Hanks液配置Fluo-3 AM，对试验结果有影响么！是不是尽量避免外源性的钙离子比较好啊？虽然知道Fluo-3 AM是在细胞内被酶分解为Fluo-3而激发显色，但是还是不敢确定.请高手解答！谢谢

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用无钙的平衡盐溶液才会有影响，因为生理性的细胞外钙是细胞内钙的10^3-4倍，若人为造成细胞外无钙环境，细胞内钙有可能通过钠钙交换蛋白等途径释放到细胞外。
当然，有一种确定细胞内钙具体浓度的方法，需要用不同钙离子浓度的细胞外缓冲液来分别测量，之后有一公式计算。但具体我没做过，你可以查查文献，有这方面的报道的。
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dragonkilly[使用道具]
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 小中大

不会吧，无钙的才会有影响？晕，我买的HBSS，是无钙的吖，不能用吗？
哦，那个fluo-3,我是在鼎国买的，50ug,200多
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
D-hanks稀释，不也就是无钙的吗？
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不会吧，无钙的才会有影响？晕，我买的HBSS，是无钙的吖，不能用吗？
哦，那个fluo-3,我是在鼎国买的，50ug,200多

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可以用。自己加氯化钙就行。市售的HBSS肯定是无钙的，因为如果加钙的话有可能形成碳酸钙沉淀。因此钙都是后加的。
我们的方法:事先配制100倍的氯化钙（0.13M）,100ml水中加入1.44g。使用时以无钙的HBSS稀释100倍即可（如，100mlHBSS中加入1ml的100×氯化钙溶液），氯化钙的终浓度是1.3mM。
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
D-hanks稀释，不也就是无钙的吗？

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染料的稀释应该问题不大。最关键的是活细胞检测时外环境的钙离子浓度。如果无钙会有影响。
当然最好也是以含钙的HBSS稀释。
D-hanks和HBSS成分好像还是不太一样。可以自己查一下。
HBSS就是hank’s 平衡盐溶液的简称。
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-4-9 19:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，我想问一下，用碧云天的fluo-3am做的效果怎么样，可靠吗？
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