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标题:[求助]肿瘤细胞复苏后的样子，类似脂滴，又似凋亡

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发表于 2012-4-13 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支原体污染或细胞分化或细胞老化都可能出现这样的现象，这样的细胞是不会增殖的。
有时候细胞刚复苏或生长条件不太适合的时候，容易出现，不过我个人认为没必要做什么特别
的调整，如果你所有细胞都这样那是有问题了，我推测你镜下这样的细胞不会多与5%，等细胞
多长几代，生长旺盛的时候这种细胞就少了。
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831226[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞膜在37°的水温中DMSO的毒性会显现，对细胞的损伤较大

——————————————————————————————————————————

请问：复苏的时候不是放到37度迅速溶解吗？
如果“细胞膜在37°的水温中DMSO的毒性会显现”是不是放到37度复苏是错误的了呢？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问：复苏的时候不是放到37度迅速溶解吗？
如果“细胞膜在37°的水温中DMSO的毒性会显现”是不是放到37度复苏是错误的了呢？

——————————

所以是缓冻快溶。
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one[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
群里有战友说，冻存的时候在-20度不要超过半小时，可是我们实验室的protocol却是-20度2个小时！！请问各位战友是不是这样做对细胞很不好？
还有一个问题是，网上很多有关复苏细胞的方法中都提到了37度复苏，1分钟内完全融化，可是我在实际操作中，一般1分钟很难彻底融化（复苏时不断摇晃）。这个会影响到细胞的状态吗？因为自己的细胞总是赖赖洋洋的不健康。请各位战友多传经验！
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

复苏的时候还是把水浴温度调到40度吧。
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-4-13 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
-20冻过夜也能复苏出来，一般的-20一个小时吧，如果有异丙醇的冻存罐也行，还有些商品化
的冻存液也可以用（悬起细胞后直接放-80，不需要任何保护，复苏效果非常好，价格有点小贵）。
至于复苏，个人推荐把水浴温度调到39-40度，不断摇晃的话，局部温度还是很低的，这样溶的快，能到1min左右。
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发表于 2012-4-13 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充说明：
复苏细胞前在超净台里准备好培养液和离心管，以便冻存的细胞溶解后迅速能转移带离心管并快速加入培养基离心，细胞从-80℃冰箱拿出来迅速在37℃水浴箱里来回晃动融化，约1分钟完全溶解。由于复苏的细胞出现类似图片中的“空泡”，而在复苏后第一次传代的细胞中大大减少类似的“空泡”细胞，再加上之前细胞在-80℃冻存大约5个月，所以本人觉得还是细胞生长不良所致，本人推测可能是细胞器的“坏变”所致。
再补充理由：复苏的细胞需1周才能长满瓶底，传代的细胞3天即可。
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发表于 2012-4-13 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻细胞的时候为什么要缓慢冻呢？ 为啥呢？
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发表于 2012-4-13 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

避免胞内出现冰晶，而伤害细胞。
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发表于 2012-4-13 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缓冻前面已经解释了，速溶是因为在细胞处于-50度这一温度点时对细胞伤害最厉害，所以要尽可能快地通过这一时间点，当然温度较高时DMSO(>1%)对细胞是有损害的，所以要速溶。
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