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人外周血单核细胞分离纯化步骤及培养
1：将枸橼酸钠或者肝素抗凝的全血（枸橼酸钠用量为100ml全血用10ml2.5％的枸橼酸钠）用生理盐水1:1比例稀释混匀。
2：把稀释的全血按2:1比例缓慢沿试管壁铺在淋巴细胞分离液（比重1.077）上，室温下2500r/min离心20min（离心时应根据离心管径和离心半径差异，设定rpm，最好能设定加减速，加速设定为4，减速设定为0。10ml离心管一般可忽略加减速影响）(15ml离心管一般加7－10ml稀释的全血，加5ml淋巴细胞分离液，用尖吸管小心吸出中间的云雾层细胞至另一离心管中，用RPMI1640基培 1500转/min×10min洗涤2次。
3：将洗涤后的细胞重悬于含10％Human AB Serum ，2mM L－Glutamine，25mMHepes，10µmol/L2－MTT，青、链霉素的 RPMI1640中，调整细胞密度为5×106 cells/ml，台盼兰拒染试验示活细胞>95%.
4：将细胞按以上浓度接种于培养瓶中，置37℃，5％CO2培养箱培养2－4h后吸出培养基，用37℃预热的培养基清洗3遍，将未贴壁细胞洗脱。
5：用0.02％EDTA作用5－10min，然后用吸管轻轻吹打使细胞脱壁分离。
6：离心沉淀细胞，用上述培养基调整细胞密度为1－2×106cells/ml，种植于24孔板。
7：待细胞生长至80－90％单层融合状态时，给予无血清培养基静止12h以上，然后给予不同处理。
