[讨论帖]“细胞培养心得 - 经验共享

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标题:[讨论帖]“细胞培养心得

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图7 接上文的图片

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2012-4-16 13:04

52539405.jpg (19.54 KB)

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图8 接上文的图片

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2012-4-16 13:04

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yes4[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人的感触"世上没有比细胞更难养的了，动不动就死给你看".我养细胞已经有一年了吧，刚开始跟同学学习还可以，但是后来我们自己完全独立操作了，事就出来了。过滤的培养基不能用，老是污染。没办法找原因，还是主任经验丰富，是滤纸惹的祸。之前的滤纸是很早以前的，很好用的。后来用完了，又换了一批。那时我很郁闷连这点小事都做不好那算什么呀。慢慢的好起来了，做了几次原代，还好没有污染。细胞长的也可以。可是后来又有一次原代培养，结果很蹊跷，细胞都死了，我们找不到原因。后来老师终于找到了，那就是我们的培养基的PH值出了问题，太碱了，所以细胞都死了。细胞培养确实想养自己的孩子一样，细心地对待它，就会好起来的。记得不能偷懒。有一次，周六周日我和我同门都不想去实验室了，周一过来一看细胞都飘了，好惨呀。还得从头再来。

woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

养细胞已经7年了，养过很多细胞，包括原代培养等，最多时一个人养了8株细胞，只见我从早到晚“霸占”着超净台，培养瓶等等，惹得实验室的兄弟姐妹们个个怨声载道。幸好技术员老师支持我，说实验室养细胞唯一放心的就是我。主要是我替她做了不少工作，保了许多实验室以前没有的细胞株的种，而且复苏后仍然长势良好，给后面的师弟师妹们省了许多心。其实养细胞就是要细心，多想为什么，细节决定成败！不同细胞生长条件千差万别，要多看文献，多摸索。有时看着下面的师弟师妹们，我都吓死了，弱弱地替他们担心。上面有站友说启蒙老师很重要，我同意，开始养成的坏习惯，很难再改正。我很感谢我启蒙老师！

is2011[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养细胞有5-6年了，也来谈谈我的体会：
1，对待细胞要象对待自己的孩子一样，要用心呵护，不能让它渴着，饿着，及时喂食给它，并创造良好的环境，让它茁壮成长
2，细胞是有感情的，你对它好，它也对你好，很给你争气的，你想它怎样，它就会顺着你的意思，否则，就象淘气的孩子一样，不听你的话
3，细胞也有心情低落的时候，所以尽量赶在它心情好的时候让它做事，这样才能事半功倍，我可以举个例子，我最初养U937细胞时，想让它分化，用尽了各种办法，加LPS+PMA，不同浓度和时间，可是细胞就是没反应，我就把这个实验搁置了一段时间，有养活它一段时间后，和它混熟了以后，重复以前的实验，结果只用PMA分化效果就非常好，以后的实验就自然很顺利，上图片：1＃[img][/img]
4，每种细胞都有自己的个性，要按他们各自的特点来培养，
如我养的平滑肌细胞很活跃，喜欢热闹，2－3天就好多人口，而且不太爱吃喝，真是最好养的孩子了2＃[img][/img]
内皮细胞和平滑肌细胞性格相近，不过它很不讲卫生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要经常换洗才行3＃[img][/img]
RAW264.7细胞也很开朗，而且很能吃，要经常喂它，头疼的是细胞很容易活化，培养它的瓶子和环境没有内毒素才好，不过我这个当妈的很难满足它了4＃[img][/img]
脂肪细胞3T3-L1正如它的名字，很慵懒，不活跃，他们倒是很团结，经常手拉手不分离，不需要我太多照顾5＃[img][/img]
成骨细胞MC3T3也是很安静的，爱和我玩隐身，想看清它的动向有点难，不过不需要我经常照顾它，自己就长的很好，算是比较省心的6＃[img][/img]
肝细胞L02让我很担心，好像生病了，不晓得染了病毒很是什么，长倒是长，就是觉得不健康7＃[img][/img]
还有很多癌细胞，就不祥述了，他们都是很听话的，只要对他们好点他们也不会调皮的
图片如下：

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2012-4-16 13:06

71985814.jpg (37.96 KB)

3648755[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是个新手，也就养了半年细胞，我的感觉是养细胞一定要足够细心。忘记提前准备好所有的东西，我曾经犯过的错误，结果是我的细胞半死不活，平时四天就能长满的细胞养了十几天还没满，搞得我情绪非常不好，导师也对我没好脸。当然无菌操作是必然的，体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。

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发表于 2012-4-16 13:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我6月份开始正式养细胞，所说不到一个月，那个心酸和痛苦已经体会到了。刚开始买细胞株回来，养的特别好，也没人带我，都是一个人看资料来养的。本来状态超好，传了三代，有七八瓶细胞，因为没冻存管没冻存，等我那瓶旧培养基用完了换了一瓶新配的培养基细胞两天全死了，欲哭无泪！所以一定要冻存。
另外一点就是一定要细心，记得我第二次传代的时候，加入胰酶7、8分钟怎末都没动静，后来一看我把谷胺酰胺当胰酶了，两个的瓶子一样的，凭感觉就拿过来了用了。幸好不是对细胞有毒的。还有一次换液，一不小心吸头落到培养瓶里了，就用镊子取出来，增加了污染的几率。

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发表于 2012-4-16 13:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我和老公都养细胞有将近6年了,算是熟手了,但是有时还是会不时出点问题,细胞就象孩子一样需要悉心的照料,老公以前养肝细胞,现在养干细胞,我呢,以前养了不同种类的血管内皮细胞,现在样平滑肌细胞希望大家多多交流哈

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发表于 2012-4-16 13:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养了10年的细胞，从原代细胞到VERO细胞至现在培养MRC-5，2BS，HPF等二倍体细胞，真像以上各位所谈到的那样坚辛，真像侍候小孩子一样，也有过污染，但都是由于使用液体包装过大，一次用不完多次使用造成的，现在细胞培养状况很好，但是自己仍然想再进行培养基的优化，不同细胞株使用的培养基及血清是不同的

ritou1985[使用道具]
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发表于 2012-4-16 13:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感谢这么多热心人提供的图片
不过大家可不可以对于细胞型号备注清楚一点啊？

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