小中大我的细胞传代原则:不用EDTA,只用胰酶,先用D-hank's洗掉残留培养基和血清,然后按1ml胰酶/10cm2培养面积加入,镜下观察,待到细胞回缩明显且尚未脱壁时(这个过程不超过1分钟),倒掉大部分胰酶,只保留细胞表面被少量胰酶湿润,37度培养箱中放置5-15分钟,直至细胞可象流沙状下滑,加入含血清培养基终止消化,轻轻吹打使细胞散开,如有团块,可考虑200目筛过滤,可不洗涤离心细胞。此种方法对细胞伤害最小,如果做流式细胞分析,也可用此法,只不过在胰酶中加 入等量EDTA溶液,出来的峰极规整漂亮。某些细胞只用常规培养基不行,还必须补充生长因子或特殊量的氨基酸才能正常生长,要多参考相关文献。
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前天试用此法,非常好,以前我在室温消化30min都下不来的,在培养箱里5分钟就搞定了。
非常好。