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标题:[求助]细胞出现匪夷所思的污染,有高手能帮忙分析一下吗?

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该区域由于细胞接种得不均匀,造成局部地区细胞绝对数量偏少。我觉得不是污染。
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okhaha[使用道具]
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既然你换了培养基情况可能好转,说明可能是这个问题,就是你的培养基里面的谷氨酰胺流失的比较厉害了,你试着补加一点进去看看
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8964357[使用道具]
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我想问一下楼主,你的培养液传代时有变颜色吗?细胞有没有明显的增值呢?我以前有次细胞感觉被污染了,但是觉得又不像,培养液养好几天都不怎么变颜色,呈桃红色,细胞也不怎么增值,也可以看到一些小亮点,后来我一个师兄看了后,说是已经污染了,而且应该是支原体污染。供你参考一下,楼主再仔细找下原因。
另外楼主说到是复苏后细胞才出现这种状况,所以有可能是你冻存前细胞有些轻微的污染,可能没发现吧~

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原来的培养基是从外面买的,也一直在用他们公司的,之前也没有出现什么问题。这一批次的培养基没开封之前颜色比较偏黄(感觉这里有点问题),但是加到培养皿里再在培养箱里放置一段时间后,颜色就是那种比较正常的红色,不是偏碱那种桃红,细胞复苏后第一次传代前后生长状态不错,但是以后增殖较以前明显变慢,而且养两天后,培养基颜色没有变化,还是红色。另外,我用的细胞是来自同一批冻存的细胞,之前用的几管都很好,所以应该和冻存无关。
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viviwang1987[使用道具]
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会不会是微量的支原体污染呢?楼主可以把该区域周围细胞取出来做一下hochest染色,看看周围小东西是否是支原体。
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zwsyrt[使用道具]
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酵母菌污染,建议用两性霉素或氟康唑冲击
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pengke1983[使用道具]
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LZ,请教你一下,你养的这个细胞还需要诱导分化吗?我是个新手,周围也没人跟我养一样的细胞,所以想跟你讨教一下,谢谢。
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wmp1234[使用道具]
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是不是在操作的时候被液体冲刷到了?以前自己做实验的时候有过这个时候,尤其是培养板。
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utt0989[使用道具]
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A:使用同批培养基及血清培养其他细胞,看是否出现相同现象。有,培养基的问题,继续查是哪个成份出问题。则说明培养基没问题。
B:同批细胞(同种细胞,重新复苏)用其他批次(品牌)的培养基及血清培养下,是否具有相同状况。有,细胞有问题。没有,你的细胞正常。
介于你已经用过其他批次的培养基了。可以试下A,看培养基是否有问题。

由于你的细胞会死亡,个人感觉是受污染的可能性比较大。
就看细胞在冻存之前有没有问题了。如果冻存前受到污染的话,那这批细胞基本就完了。
而你说的之前养的同批冻存细胞没问题的话,那比较大的可能是近期你们的细胞房或者培养箱受污染了。应该不是细菌霉菌酵母,可能是支原体或病毒吧。
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guagua[使用道具]
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支原体在倒置显微镜下能看到吗?为什么说小亮点会是支原体呢。我也遇到这种问题,细胞长得很慢,有好多小亮点,我怀疑是支原体,可是老板说支原体是看不到的。
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yhz1973[使用道具]
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楼主培养的L6大鼠成肌细胞出现培养空白抑制区,楼主不妨试试在相同的培养条件下,用同一种属的细胞进行培养试试,观察是否会出现类似的抑制区。此外,也可以试试不同的培养瓶,比如更换玻璃/塑料培养瓶。同意楼上euthor_hsu战友的说法,细胞死亡,污染的可能性大。
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