液相色谱

我的流动相是 A:40mM磷酸盐缓冲溶液 B 乙腈：甲醇：水(45:45:10)

跑完样后我用10%乙腈，60%乙腈，90%乙腈冲，

请教一下：(1)各种溶剂冲洗的时间如何判断，根据基线或压力是否稳定了吗?

(2)用多大的流速?

(3)如果用梯度流速的话，换流速的标准是什么，是不是压力稳了才能换流速?

我是液相菜鸟，请大家多多指教。

还有个问题：接上柱子后，用10%乙腈冲，该冲多长时间，怎样判断?

z最少冲一个柱体积，1的流速约等于你柱长的时间！

用跑样时的流速，10%乙腈冲半个小时，60%乙腈冲5分钟，90%乙腈冲20分钟

反相色谱柱
如果流动相里有酸、碱、盐等以10%甲醇1.0流速冲洗60分钟，再以纯甲醇（或乙腈，但一些泵用纯乙腈时常出故障）清洗30-45分钟。
如果流动相只含甲醇、乙腈、水则可直接以甲醇或乙腈清洗60分钟。
判断标准一般以10-20倍柱体积的清洗液可完全置换色谱柱中的原来流动相。

有酸、碱、盐等我们一般都只直接90%的水冲洗15分钟左右的 有时间的话就多冲一段时间  因为柱子每天都用 不知道这样是否合理呢

把A相换成超纯水
B相换成甲醇（不建议乙腈，一方面大部分泵不耐乙腈，另一方面乙腈比甲醇贵）
先设A:B=5:95 以大比例的水相冲洗掉柱子中的缓冲盐
再加大有机相比例冲洗柱子
最后以纯有机相保存柱子

不过我们是无论是含不含缓冲盐，做完后都要用高比例水的流动相（通常为甲醇：水＝20：80）冲洗。含盐的话至少冲洗30分钟，不含盐的话冲洗15分钟左右。再过渡到纯甲醇或纯乙腈，冲40分钟左右或更长时间。通常是基线平了以后再15分钟左右停机。
　有人说纯乙腈冲洗会造成单向阀故障，我们从来没有遇到过。无论岛津、安捷伦、还是沃特斯，还是国产机。故对此说法存在怀疑。