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标题:[分享帖]细胞爬片的保存和抗原修复问题总结

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发表于 2012-4-26 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过的是血管平滑肌细胞的爬片，当时一位临床病理科的老师告诉我用70％乙醇固定，在4度固定12小时以上，做免疫组化比较好，我做着效果还好。关键是配多聚甲醛挺麻烦，还要60度水浴才溶解，呵呵，本人就图个简单了。
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发表于 2012-4-26 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不用抗原修复，用1％Triton－PBS孵育可有助于暴露抗原。

我现在做的BAX和BCL-2是用丙酮固定,不需要抗原修复,可以直接做组化了,效果还可以.
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发表于 2012-4-26 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞爬片用于免疫组化要不要脱蜡水化？要不要抗原修复啊？？

因为细胞爬片本来就不用石蜡包埋，一般固定之后，可以冻于-20长期保存；实验时需要水化，一般20分钟左右；抗原修复不是必须的，因为细胞爬片要比组织切片抗原暴露好和保存的好，所以不需要修复。
但我看到过有的病理老师做Tunel时修复了一下，不过没什么影响。个人喜好的问题。
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发表于 2012-4-26 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


细胞爬片的免疫组化是否需要抗原修复，如果需要应该用什么方法？另外免疫组化中应该注意什么问题？是否时间较长就容易出阳性结果？谢谢
用多聚甲醛4度固定，一般不需修复，根据需检测的抗原和抗原所处的部位而定，4度过夜的一抗孵育条件较易出阳性结果。
的确不需要。
不需要抗原修复，抗原修复主要针对的是石蜡切片因固定剂、石蜡的制作过程对抗原的交联或封闭作用。
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发表于 2012-4-26 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冷丙酮固定, 需要多一步tritonX100处理，以便于增加细胞的通透性。
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 小中大
要用Triton X-100做细胞穿孔的。

抗原修复主要针对的是石蜡切片因固定剂、石蜡的制作过程对抗原的交联或封闭作用。单细胞所用的固定剂和石蜡不一样，过程不是很繁琐，固定时间也短，不用修复，但要充分灭活。

很多文献都介绍用冷丙酮或乙醇固定。我比较了两者的效果，觉得用80%的冷乙醇固定10分钟，固定效果比较满意。用纯丙酮或乙醇固定，细胞收缩比较明显。
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发表于 2012-4-26 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


加不加Triton是和您要染细胞的抗原分布和用途有关：Triton的作用是在细胞膜上打孔，以便抗体进入！
a）如果要染抗原分布在细胞膜上面，那么就不能加Triton；
b）但是如果抗原分布在胞浆或核内，那加入Triton就显得比较重要（虽然细胞在固定后的通透性较活细胞大，但是还不至于让任何东西都过去！）；
c）另外作电镜时一定不加Triton。
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发表于 2012-4-26 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
直接把培养板取出，吸出培养基，然后用预热的PBS洗三次（5min*3），就用4%的多聚甲醛固定做免疫组化，其余的步骤就没什么特殊了！
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 小中大
DAB显色完，不用酒精脱水，直接封片么？

细胞还可以，但是组织切片的最好还是酒精脱水。这样的观察结果会好一些！
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 小中大
聚甲醛固定后，tritonx－100通透，也可以不需要抗原修复的，正如xdb86所言在于你检测的抗原的要求，先不用修复，出不来再试一试！
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