小中大另外你的DAPI也染的太难看了点,量加少了么?
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其实DAPI已经染得很亮了,但我把亮度调低,增加曝光时间,这样才能看到GFP阳性细胞中染得若隐若现的DAPI的核,否则只是看到其他没转进质粒的细胞狂亮的核了
谢谢楼上的两位朋友的解答,也谢谢版主的置顶。
我又做了一次,这次是转染前细胞无血清饥饿24小时,转染分别从3h,8h,13h,20h不同时间点检测荧光表达。
这次不是做的爬片,观察的荧光显微镜放大倍数不够,就看不了亚细胞结构,但我发现了一个现象:
3h的时候没有表达
8h开始有表达(至于是不是确切8h还有待实验,因为我就测了这几个时间点)
13h,20h 都有表达,但我每个时间点取了五个不同的视野照相,计数表达绿光的个数,发现13h,20h表达的荧光数比8h要少了,难道蛋白表达一小会就降解了??
还有,在8h开始表达的时候,绿色荧光绝大部分是离得很近的成对出现,白光下面看就是紧挨着的两个细胞,绝大部分都是这样,我想是不是正在分裂,或者是分裂末期的细胞才有这个蛋白的表达呢?下面都拍了图,请大家走过再看看吧,谢谢了