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标题:[求助]细胞中的黑颗粒

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发表于 2012-5-2 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一种可能是血清本身的原因，有可能是血清灭活时间太长，导致血清内的蛋白聚集。其实如果是胎牛血清，不需要灭活，同时还能保持血清中的营养成分，使细胞生长的更好，楼主可以试一下。

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如果是国内得血清，不灭活可以吗？ 有的老师建议是国内得血清不灭活不使用，但是也有说灭活之后，很多营养会析出，如果不做免疫得话，不灭活也可以，到底是不是呢？

灭活我一般是56度，30分钟，可以有一次居然有一个团块析出，不知道是什么？
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-5-2 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
团块可能是脂蛋白析出，没问题的去除就好，这应该证明这个血清不错，国产血清有些还是不错的，但有些可能营养成分少些，我做过试验同样条件，国内某些血清细胞状态可保持2天，国外进口的却可以保持5、6天，还是有差别的。最好是灭活以下，可以去除一部分支原体。
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发表于 2012-5-2 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果支原体污染，不确定生长液有没有被污染，不想倒掉，怎么处理一下，确保生长液是好的？
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-5-2 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你看到的很可能是黑焦虫，如果是支原体，细胞培养液会变成发紫的红色，PH值变高。黑焦虫培养液不会有变化。你单独培养一下培养液，观察有没有你说的现象，如果有哪证明是培养液污染了，如果是支原体应该是血清里的，0.22的膜是无法除去支原体的。不过我还是倾向于认为它是黑焦虫，因为这个季节比较容易生长，春秋季。
我的培养基做了培养基实验没有问题呀
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 小中大

我觉得你细胞里黑色的是黑焦虫，同意楼上的，我以前实验也遇到过。衣原体污染情况不和你说的一样，黑焦虫污染最大的可能是血清污染，你的血清没有问题吧？
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发表于 2012-5-2 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前养细胞的时候也遇到过培养基里有大量的黑色颗粒，换液后会少一些，但一两天后又迅速生长。我认为不是细胞碎片，同意楼上的是黑焦虫，很难去除。很影响实验结果。建议，排除培养基和血清没问题后，重新复苏较低代次的冻存细胞。
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发表于 2012-5-2 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到过这个问题，具体是什么至今还没有搞明白，这种东西在你细胞不是很多的时候可能不是很多，但是当你的细胞快长满，准备传代的时候他就会长得很快。这种污染不会让你的细胞死掉但是会影响细胞的生长速度，我们曾经试过换液时用pbs多洗几遍，然后加上四环素和乳酸环丙沙星，好像对这种黑色物质有抑制作用当时并不能出去，所以你还是把这一批细胞全部丢掉，拿一支第2代的细胞养，如果可能可以考虑换一下血清也换新的！
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发表于 2012-5-2 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到过这个问题，具体是什么至今还没有搞明白，这种东西在你细胞不是很多的时候可能不是很多，但是当你的细胞快长满，准备传代的时候他就会长得很快。这种污染不会让你的细胞死掉但是会影响细胞的生长速度，我们曾经试过换液时用pbs多洗几遍，然后加上四环素和乳酸环丙沙星，好像对这种黑色物质有抑制作用当时并不能除去，所以你还是把这一批细胞全部丢掉，拿一支第2代的细胞养，如果可能可以考虑换一下血清也换新的！培养箱最好也用酒精擦拭一遍！
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-5-2 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的可否告知 四环素和乳酸环丙沙星 的具体浓度呢，我正在尝试加抗生素
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发表于 2012-5-2 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的问题和我原来遇到的问题太类似了。就是细胞刚传代的时候比较少，随着细胞增多，像沙尘状的东西也增多，到现在我还是没明白到底试试什么污染
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