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标题:[求助]培养基颜色改变

yes4[使用道具]
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发表于 2012-5-16 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上HEPES应该不是酸也不是碱只是起一个类似缓冲的作用吧。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我总觉得买的配好的培养基偏酸,你买回来大瓶培养基应该分装成小瓶
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酸碱指示剂的作用，转载网上的资料：

大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4).由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡.如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L.细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换. HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.
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bohe221[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是因为二氧化碳从溶液中散出的缘故
一般可以通过加入二氧化碳来调节pH，可以放到CO2培养箱内拧开1/4瓶盖放置20-30分钟后拿出使用
但要注意杜绝污染
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bgf5[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个办法挺有效的，不过我放在培养箱中差不多有3、4个小时，不知对培基成分会不会有影响？
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join[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的培养基第二天就会变的很黄,是什么原因呢,怎么解决啊?
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上HEPES应该不是酸也不是碱只是起一个类似缓冲的作用吧。

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HEPES
英文全称：4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid; N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid; 2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine]ethanesulfonic acid
中文全称：4-羟乙基哌嗪乙磺酸; N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸
分子式：C8H18N2O4S
分子量：238.30

HEPES buffer缓冲溶液的配制方法关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES＋NaOH，另一种是HEPES＋盐。各种配制方法总结如下：
一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2），然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。
二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。
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zwsyrt[使用道具]
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 小中大
培养基不培养细胞还是不要常放到培养箱去，因为谷氨酰胺会加快失效的，而且双抗在37度下24小时后就完全失效了，血清中的有些成分也会失效的，我用的培养基也会颜色加深，应该是变碱了，但培养时对细胞没什么影响，我的培养基配置时就补了Hepes。
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，不知楼主用的是什么培养基，如果用1640、DMEM或M199等较为常用的培养基的话，一般刚配完的时候是紫红色的，因为加过碳酸氢钠，pH在7.2左右；在细胞培养了一段时间后，因为细胞代谢的原因，培养液的颜色会慢慢变黄，是因为有酸性代谢废物排至培养液中所至。培养箱中的CO2就是为了调节pH值用的。

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培养基中一般加了酚红，当细胞生长代谢使培养液中ph变化时培养液就会由红变黄。
但是培养箱中的CO2我认为不是为了维持培养夜的ph，而是为了模拟细胞的体内环境，CO2若不维持在5%是不能存活的。
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49888[使用道具]
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发表于 2012-5-16 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二氧化碳溢出导致ph偏碱，一般配好培养液罐装入瓶后要密封可以减轻。如果偏碱，可以在使用时加入少量盐酸。或者培养细胞在放入培养箱内是拧松瓶盖。二氧化碳进入会使ph维持正常。
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