小中大[分享] 基因工程载体的选择
基因工程载体的选择:
构建或选择适合于克隆目的基因的载体是基因工程实验技术的关键。目的基因只有与适合的载体相连接,并由其引入相应的受体细胞,才能在新的受体细胞中得到增殖。目前除了大肠杆菌中的质粒、噬菌体k、噬菌粒、噬菌体M13等四类载体外,还有酵母菌质粒载体、酵母菌与大肠杆菌穿梭质粒载体、枯草杆菌质粒载体、芽孢杆菌与大肠杆菌穿梭质粒载体,以及动、植物病毒载体。
在构建或选择克隆目的基因的载体时,要根据目的基因的特性,着重考虑以下几个条件:
①有足够的容纳目的基因的幅度,并且携带的目的基因能够借助于载体的复制与调控系统得到忠实的复制与增殖。
②在非必要的DNA克隆区段有多种限制性核酸内切酶的单一识别位点,易于目的基因片段与载体的连接、重组与筛选。
③与宿主细胞有一个或多个利于检测的遗传表型(如抗药性、营养缺陷型或显色表型反应等)。
④拷贝数多,易与宿主细胞的DNA分开,便于分离提纯。