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标题:[求助]关于细胞培养的污染问题

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发表于 2012-5-18 13:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #10 junjie05 的帖子

可以考虑加pronaseE 破坏实质细胞，我是这样的，但是还是有没消化的团块，小心切碎吧，消化的就充分些。
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发表于 2012-5-18 13:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

小黑点是什么弄清楚了么，我也遇到过两次，很多小黑点到处跑，细胞也不死啊
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发表于 2012-5-18 13:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是做布朗运动的颗粒，应该是某种菌，尚不清楚
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-5-18 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
兄弟，我也在摸索中啊。C57小鼠的，消化20-30min，磁力振荡，气浴38度。collagenase IV 50mg 50ml，效果还行。但有部分包膜部分组织没有消化下来

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你这个条件下，一只小鼠能取多少HSCs细胞？
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发表于 2012-5-18 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不会很多，这几次都没计数，因为还不知道分到的是不是星形细胞，所以想培养后观察是不是，再计数
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发表于 2012-5-18 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是opti prep的15%，11.5%和GBSS 3层分离，兄弟是用什么方法？
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发表于 2012-5-18 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

nycodenz正在摸索中。。。
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-5-18 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不会很多，这几次都没计数，因为还不知道分到的是不是星形细胞，所以想培养后观察是不是，再计数

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别人论文里1.13±0.27×10,000,000 stellate cells (mean±SD, n=21) were obtained 我好像怎么也达不到这么多阿，呵呵
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-5-18 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
nycodenz正在摸索中。。。

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呵呵，Gey’s balanced salt solution/8.2% Nycodenz/17% Nycodenz 你是参考这个比重梯度吗？没有用过Nycodenz
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发表于 2012-5-18 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的，你是杀大鼠吗？小鼠的话得率不可能那么高的。我是用GBSS和Nycodenz但是这个比较麻烦，GBSS什么的要除菌过滤，用其他缓冲体系可能直接高温灭菌就行了。
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