细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]关于细胞培养的污染问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[求助]关于细胞培养的污染问题

junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
71
 
得到细胞沉淀后你吹打细胞用的是有Ca2+的液吧?好的看你的三步消化了!等你的好结果。我最近没做,写点东西,烦人哪!

我想请教下:optiprep你一次用多少,是10ml:10ml吗?然后把细胞直接铺在上面,还是用15%的溶解,后在上面铺11.5%?

————————————————————

细节我都写在我protocol了,呵呵
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
72
 
污染的问题:
这个问题我觉得跟实验室本身的条件,还有操作都有关系,因为我们实验室相对干净一点,动物都是SPF级别的,所以我上次试了消化液什么的没有用0.22micro过滤,配好了就直接用了,一开始培养基稍微脏,换过1次液后就没事了。所以,实验室本身的情节条件和操作当中的细节问题都很重要。

PronaseE和DNase的问题:我试了一次一个2个都不加,一个只加DNase。发现2个都不加的话,由于细胞中的genome和一些粘性蛋白的存在,细胞都成团,细胞大部分在消化结束,过滤大颗粒的时候卡在滤网。
只加DNase的话,虽然能够得到细胞,但是得率明显低于2个都加的情况。所以,我觉得这2个酶都是有存在的道理。
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
73
 

这个没有什么诀窍,就是多做自然就熟练了。另外根据不同梯度液,操作方法可能也不同。
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
74
 
以我的经验来看应该是真菌污染,
最好是弃之,
用抗生素基本上是徒劳。
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
75
 
楼主是否考虑改这个帖子的名字啊,呵呵,讨论的内容似乎越来越变了。
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
76
 

请问楼主知道小鼠的HSC细胞的浮力密度吗?

是1.044吗?这个是按照8.2%nycodenz算出来的。但是按照11%nycodenz算出来的是1.058。
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
77
 
请问楼主知道小鼠的HSC细胞的浮力密度吗?

是1.044吗?这个是按照8.2%nycodenz算出来的。但是按照11%nycodenz算出来的是1.058。

——————————————————————————————————————

液体的密度会根据不同的溶媒而改变,请问你这个计算的是用什么去稀释的?
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
78
 

我自己整理了一个帖子:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=12300868&sty=1&tpg=2&age=0')
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
79
 
液体的密度会根据不同的溶媒而改变,请问你这个计算的是用什么去稀释的?

——————————————————————————————————————————

这个是按照nycodenz说明书的稀释液算出来的用0.75%氯化钠或者是7.45%蔗糖的配方。
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
80
 

我明天整理个照片给大家看看,是不是HSC细胞。我第一次分的。

跟下面帖子里的instructorlyh照片
几乎一模一样。

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=10438122&sty=1')
顶部