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标题:[分享帖]肝星状细胞实验步骤

fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 gogo 于 2012-5-19 12:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

果然如此，消化液是用solutionII配制的。

请问选择I型有其他的文献支持吗？因为我看在大鼠用的几乎都是IV型。

我是自己用collagenaseI和IV 做了平行比较后选择了I的。
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gogo[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
版主，我建议你在终止的时候用冷的DMEM就够了。因为血清是有粘度的，会让细胞聚成一团。这样可以得到更多的单细胞悬液。
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 gogo 于 2012-5-19 12:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
版主，我建议你在终止的时候用冷的DMEM就够了。因为血清是有粘度的，会让细胞聚成一团。这样可以得到更多的单细胞悬液。

请问 普通DMEM和加了血清的DMEM 细胞得率有差异吗？我是说能够提高得率吗？因为我自己还没有比较过，不清楚。谢谢
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gogo[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有文献支持，说在梯度离心之前用含有DNaseI的DMEM洗涤一下沉淀。
这样可以使单个细胞游离 出来。
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发表于 2012-5-19 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 gogo 于 2012-5-19 12:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有文献支持，说在梯度离心之前用含有DNaseI的DMEM洗涤一下沉淀。
这样可以使单个细胞游离 出来。

但是含有DNase的DMEM洗的意义在于用DNase洗掉让细胞们凝聚的genome吧？
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发表于 2012-5-19 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的，DNaseI 选择性作用于DNA
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发表于 2012-5-19 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肝灌流图片非常好,干净,但小塑瓶是做什么的?我们也在做HSC实验,用Percoll分离但效果不好, ficoll也做过分离HSC不好.
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发表于 2012-5-19 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议用optiprep，至少界面看的会清晰些。

终于看到师兄的实验室啦，哈哈！
分散细胞建议用含EDTA的溶液，一方面是螯合Ca2+，减少细胞间的黏附作用，二是Dnase发挥作用需要无钙的环境。
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gogo[使用道具]
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发表于 2012-5-19 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓度呢？以1mM 为宜还是2mM ？

我的细胞变成星形状态太快了。24h后就是星形的，而且细胞在培养的时候没有出现细胞成簇的现象。

不知道大家都用怎样的密度接种？
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发表于 2012-5-19 12:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 gogo 于 2012-5-19 12:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

浓度呢？以1mM 为宜还是2mM ？

我的细胞变成星形状态太快了。24h后就是星形的，而且细胞在培养的时候没有出现细胞成簇的现象。

不知道大家都用怎样的密度接种？ ...

具体浓度我不记得了，跟PBSE中的一样，最好可以加入5%左右的BSA，对细胞形成保护作用，另外，BSA溶液可以在细胞膜外形成一层蛋白膜，阻止细胞间黏附的形成，减少细胞团块形成。
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