细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [分享帖]小鼠肝星形细胞原代制备专帖

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[分享帖]小鼠肝星形细胞原代制备专帖

园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
21
 
你的纯度是什么时候计算的?用什么方法?确实一开始提取后荧光看的话纯度很高,然后等细胞活化后alpha-SMA 免疫染色,但是到了7天的时候,杂细胞会一簇一簇的分裂很多,比如kupper,比如fibro,一开始很少但是到了7天这个很少也会变很多。显然到了7天纯度不再是90%以上那么高了。不知道你有没有这个经验。

————————————————————————————————————————————————————————————————

这是常识,
我已经说过了,我只能让它尽可能的纯,我做不到一个杂细胞都没有,(谁能做到告诉我一声)
只要有它就会不停的分裂,到7天的时候自然会增多,
不过原代细胞对我没有用,我是做传1-3代的,纯度和数目对我来说都没有问题,
你既然要做原代的, 你就面临着鱼与熊掌的问题,你想提高纯度,得率不高;想有满意的得率,纯度会降低,除非你一天可以分他个三五只,

可以试着用CL2MDP去除枯否细胞,只是做脂质体本身不是一件轻松的事,
你明白实验中对照的重要意义了吧?
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
22
 


QUOTE:
原帖由 园丁## 于 2012-5-19 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的纯度是什么时候计算的?用什么方法?确实一开始提取后荧光看的话纯度很高,然后等细胞活化后alpha-SMA 免疫染色,但是到了7天的时候,杂细胞会一簇一簇的分裂很多,比如kupper,比如fibro,一开始很少但是到了7天这个很少也会变 ...

不好意思,刚开始学习细胞,所以有些常识不是很明白。那么论文中所说的纯度大于90%,是指刚分离的时候的;而过了几天,纯度也许就达不到90%,是吗?
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
23
 
我是做传1-3代的,纯度和数目对我来说都没有问题,

——————————————————————————————————————

如果一开始纯度不够的话,传代后能够解决这个问题吗? 谢谢,请指教。
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
24
 
细胞分离出来的时候,个体最大的就是HSC吧?

分离出来的时候我看了一下荧光,感觉最大的细胞呈蓝色,有自发荧光现象。
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
25
 
细胞分离出来的时候,个体最大的就是HSC吧?

分离出来的时候我看了一下荧光,感觉最大的细胞呈蓝色,有自发荧光现象。

——————————————————————————————————

个体最大的是肝细胞,然后细杆状是kufpper,剩下的稍微小的是hsc
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
26
 

培养活化之后就清楚怎么样啦,Kupffer细胞活化的比较早。
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
27
 

我太难过了,细胞分离出来不贴壁,可能是污染了;或者是消化过度。
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
28
 
又被污染了,我的天!长满了6孔板,什么都有霉菌细菌, ft。。
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
29
 

我建议你检查一下自己的试剂,可能是漏了一个没有用细胞培养级别的。最基本的就是无菌。

包括任何用过的试剂,全部检查一遍。
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
30
 

day4,HSCs X100


查看积分策略说明
附件
2012-5-19 15:37
30846707.snap.jpg (19.95 KB)
 
顶部