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标题:[求助]如何取乳鼠心脏?定位?

jrwyyplt[使用道具]
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我为了 确认不是消化过度的原因,消化的时间非常短,消化下来的细胞也不多,所以消化过度的因素应该排除了,至于材料问题,我跟其他同学用了同一家的乳鼠,共用培养基,胰酶,操作也是在同学的全程指导下进行的,确认没有问题,但是她的心肌细胞可以贴壁,仔细观察下她的细胞也有小亮点,但是数量很少,不影响细胞贴壁,她的细胞也可以搏动。所以我实在找不到原因了
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园丁##[使用道具]
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回复 #21 jrwyyplt 的帖子

实在是不清楚所谓的小白点是什么东东。
你在另外一个帖子说收集上清,离心,弃去上清,,弱弱的问一下消化后是否是将收集好的上清用含血清的培养基及时终止了,还是直接将收集到的上清离心。我在操作的过程中是提前将含血清的培养基放入离心管中,每次消化好后直接将上清转移到含血清的离心管中。再将10ml的离心管拧紧然后用封口膜封口,转移到4度冰箱中,待最后消化完后一起离心、重悬。另,你的帖子中说到用0.1%的胰酶消化时每次的时间是3分钟,时间是不是有点短啊,当时的消化液浑浊了吗。
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u234[使用道具]
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谢谢各位战友的热心帮助,请继续指点迷津。我是在乳鼠第五肋间横切皮肤,事先浸泡酒精3min,老鼠已经死亡,有些拉便便,是否浸泡太久了。切完皮肤,碘伏消毒,换器械切开肌肉,再换剪刀剪心脏,不过因为停跳,不好取,有时也用镊子夹取。取出心脏在无菌培养皿洗涤,剪碎,加胶原酶消化。吸取上清入加血清培养基,收集所有消化液后离心,加培养基吹散贴壁,此时就已经发现黑色小颗粒在做布朗运动,如此失败重复近10次,我现在处于绝望停工阶段,请大家多多指教。

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我们取新生小鼠心脏,不让其死亡,在酒精中沾一下即可。
1、用眼科剪从腹部一直剪到气管,在气管处剪一下,用眼科剪将心脏勾出即可
2、我们师姐用剪刀横断小鼠,心脏可直接暴露,剪下即可
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pengke1983[使用道具]
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我的心肌细胞中也有小黑点,做布朗运动,但是不影响细胞贴壁,细胞状态很好,12小时后有部分搏动,第二天达到高峰了。前段时间也是不搏动,我也怀疑是小黑点的问题,以前一次做10只鼠,后来改成20只就好了,我用的是分次消化,10只很容易就消化过了,碎片很多,取材的时候我是先用碘伏泡一次,再用75%酒精泡一次,时间短些,活着取,先用眼科剪将皮肤剪开,再换剪剪开肌肉,心脏就自动跳出来了,剪的时候尽量一下剪下来,不要让它碰到皮肤。
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ROSE李[使用道具]
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大家的热心指导,非常感谢。我的细胞里的小黑点加了新洁尔灭就不动了,我觉得还是像微生物。好头疼,又培养不出细菌。
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ROSE李[使用道具]
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谢谢各位大侠指导。小黑点是细胞活力问题。我采用分次消化,分次离心,及时用血清培养基保存于4度冰箱,最后集中贴壁接种,现在虽有小黑点,但细胞存活搏动。换液后黑点消失。感谢大家的热情帮助!感谢丁香园!
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viviwang1987[使用道具]
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各位的纯度和细胞存活率如何?
我现在纯度问题解决了,但是存活率还是非常低。不知道各位的胶原酶买了哪家公司的,消化时间多长?谢谢。
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