液相色谱

各位大仙大家好，最近我在做一个复方制剂，柴胡为君药，要摸索柴胡皂苷的色谱条件，由于柴胡皂苷是末端吸收（210nm)，在安捷伦1100上面做的基线很不稳，后来我换为waters2695走三维图，想确定究竟哪个是柴胡皂苷D的峰，走了梯度以后(A:水。B：乙腈。乙腈梯度变化为：0---5min:45---45，5---10min:45---20，10---50min:20----90,50---55min，90----45）发现在30min有个像柴胡皂苷D的峰，但是它分离度很低，和另一个峰几乎就是重叠在一起了，分不开，尝试了好多梯度都分不开，我现在必须要把柴胡皂苷df分出来，希望大家帮我想想办法，谢谢

应该先进对照确认好位置再优化！

你的梯度变化太频繁，不适合做末端吸收
我觉得先走一个条件，找到了峰再来改善分离

我有先进对照品，对照品保留时间就是在29.803min，因为我做的是复方，成分很多，所以同样在30Min左右出峰的有好几个物质，我用waters走3D确认究竟哪个是柴胡皂苷D，现在大概确定好以后呢，发现柴胡皂苷D与杂质峰分不开，现在就遇到这样的问题，谢谢你的回复

我之前走得就是等度水：乙腈（55:45），走出来的峰也分不开，由于我做的是复方制剂，成分很复杂，而我的前处理就是水提浓缩到50mL，用水饱和正丁醇萃取3次和氨水洗两次以后，挥干甲醇定容后进样，这样走出来的峰也分不开，所以我换为梯度想把水溶性杂质先冲出来，指标性成分往后移，换了以后还是没有达到理想效果。