小中大鼠巨噬细胞系 RAW 246.7养起来算是挺方便的细胞种类了.生长力较强,传代时容易消化,细胞个体小,相对数目多,生长较快,有利于实验的进行.(当然,也是不好处--不作实验的空当也需每天照顾着)
我基本上是每天都传代,传代后细胞6小时左右可贴壁.
我们实验室的传代方法是:
1.细胞长至70%~80%密度时,需要分瓶传代,将瓶中的培养基倒掉,D-Hhanks液清洗两遍
2.加入约3ml的胰酶(0.1%的浓度,不加EDTA,RAW 246.7细胞很好消化)
3.消化两分钟左右,在镜下观察细胞状态,当视野中有几个漂起的细胞,贴壁的细胞之间分开,变圆时,立即倒掉胰酶,加入适量10%血清的培基(血清一般用的是新生牛血清,培基中DMEM,1640都用过,感觉前者容易让RAW 246.7细胞长成堆,但也要看细胞的性质了)
4.轻轻吹打下细胞,一分为二,最好再在显微镜下观察一下每瓶细胞的多少,之后放入培养箱.(吹打的时候力度不要过猛,应该用培养基把细胞冲下来. andy829210推荐的拍打瓶底的方法我准备试试)
据我所知,鼠巨噬细胞系 RAW 246.7是单核-巨噬系细胞,当长的"过老"时(比如传代不及时)细胞形态发生改变,由圆形/椭圆型变成巨多变型,长出伪足,此时的细胞就不是理想的实验对象了,它对刺激会不敏感.
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ATCC上的照片
