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标题:[未解决]【求助】经过色谱柱后荧光信号大大降低为什么?

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melody9566[使用道具]
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【求助】经过色谱柱后荧光信号大大降低为什么?

  使用荧光检测器时,样品不接色谱柱,直接进样到检测器,信号很强。

  所有条件没变,接上色谱柱后再次进样,信号极度减弱,只有原来的1/10,百思不得其解。

  特向各位请教
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  • miracle   2012-5-28 23:59  可用分  +3   鼓励发起讨论,欢迎常来交流! ...
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thereyoube[使用道具]
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回复 #1 melody9566 的帖子

不接色谱柱可能是所有信号集中出现,过了色谱柱就是分开了,不然就是色谱柱吸附,方法是成熟的标准方法吗?
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owoo[使用道具]
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回复 #1 melody9566 的帖子

溶液是磷酸盐缓冲液和乙腈,应该很稳定
方法也是老方法了,2年前还做过,当时灵敏度够,也就没拆柱子试验,不知道当时是不是也有这种情况。
但现在灵敏度不达标了,也不知道该咋办。
色谱柱的填料会造成荧光淬灭吗?查了好多文献,没发现有这种提法的。
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HEC_css[使用道具]
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回复 #1 melody9566 的帖子

把以前的图谱调出来看一下就知道了,同时检查一下灯的能量值,最好能做一个荧光扫描。
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hplcangel[使用道具]
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回复 #1 melody9566 的帖子

首先楼主不是衍生的吧?如果是衍生的一般试剂实际过量,经过色谱柱分离后过量的衍生实试剂分来了,所以峰就小了。如果楼主不是衍生的,那么经过色谱柱和没经过色谱的液相条件是不一样的(有机相的比例变了),荧光强度与溶剂也有关系奥,刚走了个样,改变梯度提前2分钟,灵敏度就下降一半。
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aa1380[使用道具]
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回复 #1 melody9566 的帖子

或许荧光强度与流动相的比例有关系
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