[求助]Hep3B细胞的培养

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标题:[求助]Hep3B细胞的培养

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近在养Hep3B细胞，培养液用MEM＋10％FBS＋1％P/S，是从别的实验室要来的，觉得状态不太好，细胞大小不一，轮廓也不清晰，而且细胞消化以后很难吹散，计数时发现经常有几个细胞粘在一起成团。以前没有养过这种细胞，想请教一下养过的同志Hep3B的这种情况正常吗？养的时候应该注意什么？

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好像不是很正常啊
实验室长辈说3B是最贱的细胞，很好养，我养的3B疯长，就DMEM＋10％FBS＋1％P/S，随便一消化，很容易脱壁，很容易吹散，有时候一天就黄了，这是随便拍的一张
注意密度不要太稀，其他的都还好啊

附件

2012-5-28 15:19

72807859.snap.jpg (20.88 KB)

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

发一张我养的细胞图片，请大家帮我看一下，这个细胞是不是生长形态有问题。

附件

2012-5-28 15:20

94921806.snap.jpg (58.14 KB)

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再发一张高倍镜下的图片

附件

2012-5-28 15:20

76383454.snap.jpg (44.12 KB)

tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

二楼的不知道你的细胞传过多少代了，你的细胞状态已经不是ATCC的细胞一个状态了，边缘特别明显，
楼主的细胞基本还可以，但是这个细胞就是这样长得很慢得，而且比较难消化，吹散，我们一般是用含有EDTA得胰酶消化自然飘起，还有一种较好得方法就是等细胞消化快飘起来得时候倒掉胰酶，让剩余得胰酶消化较长时间

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

个人消化的心得是：当镜下观察，有几个细胞在眼前漂浮晃动，就已经消化的差不多了，这时中止消化，吹打很轻松

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上的意思是Hep3B这种细胞消化的过一点会容易吹打，而且对细胞状态没有太大影响？另外传代的时候是不是多一点细胞长得会好一些？

yes4[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

二楼的细胞更像HepG2的形态，HepG2是长梭型的，轮廓清晰，但我们实验室的细胞个头比较大，我不知道你的是不是细胞密度太大了，所以显得个小。楼主说的Hep3B确实不是很好养，此细胞轮廓不是很清晰，个头大，有点网状形式，细胞伸展得很开，生长也较慢，建议传代的时候细胞密度大点，1：2传吧。细胞显得有点脏，可能来源于血清,若是，可辛苦点将血清过滤一下，但也可能是细胞本来状态不好，凋亡较快的原因造成的，建议用FBS，且提高血清含量到15%培养一段时间后改为正常培养基。一般情况下血清刺激后细胞都能恢复过来的。
祝你成功！

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢大家，我现在试着将细胞按不同比例分别传代，消化的时候等细胞都自然从壁上脱落下来，吹打多几次尽量打散细胞。看看可不可以把细胞救回来。

dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-5-28 15:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我吹打很多次还是不能完全吹散细胞，显微镜下看到Hep3B还是三四个一团，三四个一团，有什么办法可以解决这个问题吗？

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