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标题:[求助]离心转速大时间长对细胞有影响么？

lgm[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #10 ququer787 的帖子

可是复苏贴壁细胞一般都要离心的,你的水温适宜吗?
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969[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
昨天又试了一管复苏，还是那个贴壁细胞耐药株SGC7901/ADR,离心采用500r 5分钟，今天看还是不行啊，也试着提高把百分之十的FBS提高到百分之十五，细胞还是不行，换液看似帖壁可始终细胞呈黄色小圆点就是不长啊，怎么办？？急！！！

——————————————————

多传几代就可能会好点
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我平时都用1000RPM，10MIN，
今天离心时用了5MIN，但是肉眼看好象没有细胞沉淀下来所以有继续转了10MIN ，过两天在侃侃长势如何把，我决的是不是5MIN 太短了点而？？
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般情况下，500g（相对离心力）5min就足够了。
但是很多离心机计算相对离心力不方便，特别是国产的简易型非低温非高速离心机，通常就用800~1000rpm离5min是足够把细胞沉淀下来的。
时间再长，转速再高的后果大多是细胞损伤甚至碎裂，不提倡。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们还常用一种不离心复苏细胞的方法：直接把冻存管中的细胞吸至培养瓶中直接培养，5h后待细胞大致贴壁后更换培养基。
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冷冻细胞冷冻前的状态就好吗?冷冻降温过程不对也影响细胞的质量。离心首先要知道你所需的离心力是多少克？离心机的离心半径不同，同样转速下离心的效果截然不同，知道离心力算出你使用离心机离这种细胞的转速，同时时间与转速可依细胞的比重大小掌握，比重大的细胞转速低些，时间短点，否则反之。娇贵细胞更要注意这点！
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lgm[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也试过不离心直接将细胞复苏后直接放入培养瓶加培养基培养，第二天换液全是不贴壁的浮动的死细胞，怎么办啊，就是养不活！
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bohe221[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议先直接用培养基培养，隔日在离心传代。我以前也碰到过这种情况，先让它恢复好再传。
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ero11[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得楼主不能就把问题定格在离心速度上吧，你的培养液的酸碱性、细胞密度或者你的细胞需要添加生长因子等都需要考虑。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我都是1000rpm 2min。我觉得细胞长得挺好的阿
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