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标题:[求助]离心转速大时间长对细胞有影响么？

skytree[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我培养细胞瘤细胞系曾经误离过3000转,5分钟,细胞状态仍然不错.况且冻存时加入的DMSO量不是很大,就是不离心去除也不一定会影响细胞的状态.所以细胞状态不好,不一定是离心的问题.同意楼上的意见,并建议,用同批培养液同时培养另外的,比如已复苏的细胞,看是否是培养条件或培养液的问题.
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莲花白[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

3000R/3min！离心时间不宜长，转速差不多不影响什么的。你在离心前加FBS中和掉胰酶。800都离不下来没细胞还搞什么？！
离心后吹散时吹轻一点，吹几下，确定吹散即可。FBS不用加大量，就保持10％，还是不行就考虑买贴壁因子加进去好了。
信不信由你哦，试验是试出来的！！
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近也做了一个293细胞，但是2000r/m 10分钟，细胞也不沉淀。感觉是不是培养基的问题？细胞本身的问题会不会也影响沉淀？
有点迷惑
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发表于 2012-5-30 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得楼主首先要确定的就是复苏的细胞在冻存前的状态是不是很好，还有就是培养液酸碱度是不是合适，再有就是可以查一下文献看看是不是这种细胞需要加入一些特别的生长因子，我以前养细胞也试过不离心多用培养液冲洗几遍冻存管，跟离心的比较没什么大影响！
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是甘油配制的冻存夜，直接复苏 加培养液，不用离心 第二天换液就可以了。离心500/5min就可以了 呵呵 仅供参考
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langlang[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞刚复苏状态是不大好，慢慢观察几天，离心500转/min,5min就可以了，觉得只要细胞离心沉淀下来就达到离心目的了，你说细胞状态不好，也可能是当初冻存就没冻存好。
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泡泡[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最主要的原因就是冻存的细胞不合格：甘油做培养基效果要差些，用90%血清+10甘油（含0.15DMSO)比90%培养基的要好，复苏细胞根据细胞种类不同，一般5小时左右换培养基，比过夜或10小时以上细胞存活率要高；再有就是冻存细胞时细胞并非处于对数期，或其它原因大致的状态不佳。如果复苏状态不好，也可以让细胞多挺几天，别动它，也有助于恢复。

上面其他人说的其它原因也可能有，但根据你的提问来看可能不是主要原因。
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泡泡[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

笔误：0.1%DMSO
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小野花[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我有一次复苏细胞后也是不贴壁，那次我是用90%血清+10%DMSO配制的冻存液，而且当时也有很多问题，比如复苏的水温、放入温箱后瓶盖拧得过紧等等。后来我再冻存时用的是20%血清+10%DMSO+70%DMEM的冻存液，复苏时也更加小心，结果就比较好。所以我想建议你：仔细回想一下冻存液的成分是不是不合适？冻存过程是否合理？复苏时一定要快速解冻，水温稍高一点都没有关系，为了让细胞尽快贴壁可以适当增加血清浓度，放入孵箱时注意瓶口的松紧度，我一直觉得拧稍微松点有助于细胞贴壁和生长。祝你好运！
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remenb[使用道具]
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发表于 2012-5-30 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞离心一般最好控制在500g以下，对剪切力敏感的细胞100g，在离心过程中有血清的存在也会保护细胞免受剪切伤害。

细胞状态不好也不要紧，勤观察，多换液（减少细胞有害物积累），一般3－4代总能恢复过来
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