【分享】薄层色谱测定法原理

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标题:【分享】薄层色谱测定法原理

danning2006[使用道具]
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发表于 2012-6-3 12:29 资料个人空间短消息加为好友

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　　内容摘要：本方法的实验原理是抗原一抗体反应。玉米赤霉烯酮偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有玉米赤霉烯酮的样品或者是标准溶液和酶标记的玉米赤霉烯酮(酶联)加入到小孔中，此时固相包被的玉米赤霉烯酮和样品、标准品中游离的玉米赤霉烯酮竞争性地与抗体进行键合反应。未反应的物质用洗涤溶液洗去。

　　本方法的实验原理是抗原一抗体反应。玉米赤霉烯酮偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有玉米赤霉烯酮的样品或者是标准溶液和酶标记的玉米赤霉烯酮(酶联)加入到小孔中，此时固相包被的玉米赤霉烯酮和样品、标准品中游离的玉米赤霉烯酮竞争性地与抗体进行键合反应。未反应的物质用洗涤溶液洗去。

　　在小孔中再加入酶底物(尿过氧化物酶)和发色剂(四甲基联苯胺)并且保温。键合的酶联物使无色的发色剂变为蓝色。加入停止溶液终止颜色反应，使蓝色变成黄色。用酶标仪在450nm(另一可选择的参考波长≥600nm)处测定吸光度。样品中玉米赤霉烯酮的浓度与吸光度成反比关系。

　　试剂酶标板(每个小孔中均包被有玉米赤霉烯酮偶联物)、玉米赤霉烯酮标准储备溶液(浓度依次为0、50pg/mL、150pg/mL、450pg/mL、 1350pg/mL、4050pg/mL)、过氧化物酶标记玉米赤霉烯酮(浓缩液)、底物溶液(7mL，含有尿过氧化物酶)、发色剂(7mI一，含有四甲基联苯胺)、终止液(14mL，含有1.0mol/L硫酸)、样品稀释缓冲(50mL)、标记稀释缓冲液(7mL)、二氯甲烷、甲醇、正己烷。用于a一淀粉酶消化的其他试剂：a 一淀粉酶溶液(Sigma No.3176，10000U，提炼自猪的胰腺)。a一淀粉酶的PBS溶液：O.5g/mL，轻轻摇晃溶解，在冰箱中最多可储存3d。PBS缓冲液：pH 7.2(0.55gNaH2P04•H20+2.85g Na2HP04•H20+9g Nacl，用蒸馏水溶解并稀释至1000mL)。

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miracle 2012-6-4 14:06 专家分 +3 感谢楼主的分享与交流。。。

sctc2007_g[使用道具]
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发表于 2012-6-4 14:00 资料个人空间短消息加为好友

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文章精彩，谢谢分享。